報告基因檢測,是真核基因表達調控研究的常用方法。由于檢測光量子的方法非常敏感,采用生物發光(bioluminescent)法,是報告基因檢測最常用的有效手段。熒光素酶(luciferase)催化底物熒光素的轉化,發射出光子。螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)和海腎熒光素酶(Ranilla luciferase)催化的發光反應,具有相似的光學特征和很好的濃度線性范圍(7~8個數量級的線性范圍),酶的檢測靈敏度達10-18mol到10-20mol,但兩者催化的化學反應底物和最適反應條件完全不同。這兩種熒光素酶配合形成了十分有效的雙熒光素酶報告基因系統,其中Ranilla luciferase通常作為內參照。
本試劑盒提供了一體化形式的雙熒光素酶檢測系統。采用通用裂解緩沖液,適合于兩種熒光素酶活性的保持,且與其他類型的報告基因檢測和蛋白含量檢測兼容;優化的兩種酶反應體系,使每種發光反應持續數十分鐘,以便于手工操作多個樣品;并保證Firefly luciferase發光及時淬滅,不影響后續Ranilla luciferase的測定;優化的反應體系還使兩種熒光素酶活性比值趨于合理的敏感范圍,更有利于后續數據的比較。
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產品內容與儲存方法: 名稱 數量 保存條件
5x Universal Lysis Buffer (通用裂解液) 25 ml -20℃
Fassay Buffer I (蟲酶緩沖液) 10 ml -20℃
Fassay Substrate I (蟲酶底物) 0.5 ml -20℃
Rassay Buffer II (海酶緩沖液) 10 ml -20℃
Rassay Substrate II (海酶底物) 0.2 ml -20℃
可作100次雙熒光素酶檢測。低溫運輸,-20℃或-80℃避光保存。有效期6個月。
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