?細胞表面抗原染色——直接標記?
?
本篇文章由專業生化試劑供應商上海嵐興生物為您提供.
?
A. 所需溶液和試劑??
1. 磷酸鹽緩沖液 (C01-01002)：0.1M PH7.4 1X PBS
2. 固定液：4%多聚甲醛溶液（無甲醇）(C01-06001)；1%多聚甲醛溶液（無 甲醇）（C03-02001）
3. 穿膜劑(C01-03001)：0.3% tritonX-100
4. 抗體封閉液（C03-03001）：10%山羊血清溶液
5. 孵育緩沖液(C03-03002)：2% BSA 的 0.1M PBS
6. 抗體稀釋液(C01-04001)：1% BSA, 0.03% Proclin300 的 0.1M PBS
? ? ? ? ? ? ? B. 樣本處理——固定
1. 離心收集細胞，棄上清。
2. 將細胞重懸在 1 ml PBS(C01-01002)中。加入等體積甲醛溶液(C01-06001) 至終濃度為 2%，37°C 固定 10 分鐘。（或者用 70%的冰乙醇 5-10ML ,4℃ 固定 16 小時）
3. 放在冰上降溫 1 分鐘后加入 1 X PBS ，800rpm 離心 5min 去上清，重復一 次。
C. 抗體標記
1. 將 0.5-1 x 106 個細胞分到各檢測管中。
2. 各管加入 2 ml PBS(C01-01002)，200g 離心 5 分鐘, 回收細胞；重復一次。
3. 向每支檢測管中加入 100μl 孵育緩沖液 (C03-03002)重懸細胞。
4. 再向每支樣品管中加入 100μl 10%山羊血清的孵育緩沖液（C03-03001）， 室溫，封閉 15 分鐘。
5. 向每支樣品管中加入經抗體稀釋液(C01-04001)按合適比例稀釋后的熒光 一抗，室溫孵育 30 分鐘。
6. 加入 2 ml 孵育緩沖液，200g 離心 5 分鐘，離心回收細胞；重復一次。
7. 將細胞重懸在 1%多聚甲醛溶液（C03-02001）中然后用流式細胞儀檢測。
注意：
1）甲醛溶液加入量為 1X106 cells / m L。
2）冰乙醇與冰甲醇的加入方法： 向細胞中逐滴加入冰乙醇；向細胞中緩慢加入冰甲醇。
3）同型對照的設置。
4） 標記前細胞計數。