?TGIRT-III Reverse Transcriptase
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| TGIRT-III RTnase具有依賴于DNA/RNA雜交鏈的反轉錄酶活性，能快速合成cDNA，該酶具有強的鏈轉換活性（Switch）。因此該酶可用于tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆轉錄和加接頭（TGIRT template-switching reaction，用于TGIRT-Seq）。TGIRT-III RTnase具有極強的延伸性能，因此更易獲得全長的cDNA。除此外，該酶具有的強switch活性，使得可以利用RNA的5’端帽結構進行SMART建庫（SAMRT-Seq）。該酶的反應溫度為37-60°C，最佳反應溫度為50°C。 | ||||||||||||
主要特征 |
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組分 |
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應用 |
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失活 |
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| 反應結束后，向反應體系中加入1μl的5N NaOH，并置于95°C下加熱3min，失活該酶。失活后加入5N HCl中和高堿性條件。 | ||||||||||||
儲存 |
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| 長期儲存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于4°C（3個月）保存。 | ||||||||||||
使用方法 |
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| 1.典型的TGIRI-Seq反應： 5×TGIRT Buffer? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?4 μl 100mM DTT? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2 μl RNA? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1~50ng 1μM of Annealed DNA/RNA duplex ?????? 2 μl TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl)? ? ? ? ? ? ? ? 1 μl RNase Free H2O? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?up to 17.5 μl |
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室溫孵育30min后，加入2.5 μl的10mM dNTP后，于37-60°C（推薦溫度為50°C）條件下反應5-60min（通常15min）。 |
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