細胞抱團,怎么辦?-技術前沿-資訊-生物在線

細胞抱團,怎么辦?

作者:上海逍鵬生物科技有限公司 2020-07-20T10:55 (訪問量:9318)

細胞為啥總是一言不合就抱團生長?!

是細胞污染了還是正?,F象?

是消化不好了還是鋪板有問題?

抱團細胞越來越多,怎么樣才能讓細胞分開生長?

請認真閱讀以下干貨,看看能否幫您答疑解惑!

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01

細胞抱團一定代表細胞狀態不好嗎?

細胞生長的時候肯定是要相互聯系,大部分的細胞都是要成片生長的,應該仔細觀察每種細胞的狀態,抱團并不一定代表不好:

  1. 1. 若細胞輪廓清晰,可看清楚一個個的細胞,像葡萄一樣,一串串的,是狀態好的,說明細胞在分裂。

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  2. 2. 但大部分細胞抱團絕對不是一件好事!如果輪廓消失,出現細胞融解或細胞變灰暗、透光性變差,就是細胞死亡了。葡萄狀和抱團,在鏡下其實很容易區別。抱團死亡的細胞可以看到細胞碎片,如下圖:


    細胞抱團

  3. 3. 細胞抱團是因為細胞污染了嗎?一般細胞培養液清亮,就不是污染。如果是污染了的話,可以通過觀察培養液顏色,若污染,則很渾濁。

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02
細胞為啥總是喜歡抱團?
  • 1. 細胞死亡釋放出DNA,纏繞其他細胞,形成黏性的細胞團(消化的過程可能過于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太強或有毒性等)。

  • 2. 細胞離心速度過大或時間太長。

  • 3. 消化不完全的時候,細胞和細胞之間的連接沒有分開;消化過度的時候,圓形的細胞容易聚堆,再分開很困難!

  • 4. 狀態不好、老化的細胞,也可能會出現抱團生長的情況(比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態差)。

  • 5. 傳代時沒有吹打均勻,細胞團多,培養時就會是一團一團的。

  • 6. 傳代后細胞鋪板不均勻。

  • 7. 有可能是雜細胞,或者死細胞。

  • 8. 接種不均勻,或者是細胞未消化開。

    9. 非震蕩培養或細菌(胞)量過多的話就會成團。


03
如何避免細胞成團?
  1. 1. 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞。
  2. 2. 對于貼壁非常牢固的細胞(如MDCK),為了細胞更好的狀態,更漂亮的樣子,建議分多批多次消化,這樣才能最大限度地降低胰酶對細胞的損傷,保證細胞的狀態能夠最優。
  3. 3. 細胞生長密度不要太高,70%-80%就好(細胞剛剛基本成單層細胞,沒有出現成層生長),這樣細胞抱團的幾率就大大減少了。如果細胞已經長成集落,可先將細胞低密度傳代,第二天再消化傳代,這樣連續傳三次,細胞抱團就會越來越小,這樣幾代過后,再按照常規消化方法和時間能將細胞逐漸傳成單個的。
  4. 4. 消化過程中最好不要使勁搖動培養瓶,這樣細胞特別容易成屑樣脫落。細胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(因為細胞沒有受力點了,所以細胞很難分散開)。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開,嚴格控制好消化程度。


04
細胞抱團了,要如何處理?
  1. 1. 如果細胞抱團不影響生長就沒問題,只是計數時較麻煩。在消化時,可在細胞由多角形變成圓型之前,用手輕磕培養瓶的側壁,使細胞從壁上脫落(最好不要吹打,對細胞形狀和生長都不好)。

  2. 2. 如果感覺有死細胞的DNA,在細胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse(1mg/ml溶于水)將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細胞,防止對細胞膜造成物理損傷。

  3. 3. 如果細胞抱團是肉眼可見的,可讓細胞靜置半分鐘左右,然后吸取上半部分沒有抱團的細胞懸液來傳代。如果細胞抱團肉眼不可見,目前還沒有特別好的分離方法,只能等細胞狀態改善后將這部分細胞慢慢排除出去。

總結

引起細胞抱團的根本原因是細胞狀態變差,且在吹打細胞的時候,那些狀態好的細胞也會因為多次吹打而受損,所以我們認為最根本的解決方法是摸透培養的細胞的生長習性,讓細胞保持較好的生長狀態。

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