遠慕生物: elisa測定法測定抗體-分析方法-資訊-生物在線

遠慕生物: elisa測定法測定抗體

作者:上海遠慕生物科技有限公司 2016-12-05T00:00 (訪問量:9851)

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關鍵詞:抗原-抗體 elisa 酶聯免疫 試劑盒檢測試劑盒

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原理

其基本原理可概括為:將特異的抗原-抗體免疫學反應和酶學催化反應相結合,以酶促反應的放大作用來顯示初級免疫學反應。因此,酶免疫技術一般均有兩部分組成,即一次或數次免疫學反應和一次酶促反應。抗原、抗體發生特異結合過程中,設法引入酶結合物,如酶標記的抗抗體,然后加入酶的底物,在酶催化下生成有色產物,反映出被測定抗原或抗體的量。


操作流程、類型及特點

操作流程:

檢測抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體,經4℃過夜,以無關蛋白封閉至少2小時以上,加入待測樣品,室溫孵育1小時,洗滌干凈后加酶標抗體,再經室溫孵育、洗滌后,以底物顯色,顯色到一定程度終止反應,在酶標儀上讀結果或以肉眼判斷。

類型:elisa具體方法的類型繁多,試劑的標準化問題還未最后解決,溫育的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數等都是影響測定的因素。但參考以上基本過程,無論怎樣變化,均離不開抗原-抗體反應、酶標抗體的免疫學反應及酶催化作用。

特點:1、敏感性高,可檢出濃度在ug~mg/ml水平;2、特異性強;3、重復性好;4、快速、簡便、廉價。


實驗條件

固相載體:可作為固相載體的物質很多,如:纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等??梢愿鞣N形式出現;試管、微量反應板凹孔、小珠.....。最常用的是聚苯乙烯制品,其吸附性最好。固相包被的機制一般不外乎物理吸附和共價交聯,

封閉:以無關蛋白占據載體上未被包被的空隙,常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。

待測樣品:稀釋度要合適,濃度太大會發生非特異性吸附造成假陽性,過分稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學反應。選擇最適稀釋度,在實驗體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。

酶結合物:使用高質量的酶結合物是elisa成功的關鍵。


注意事項

酶聯免疫技術的試劑標準化問題尚未完全解決,溫育過程的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數都是影響最后測定的因素。為使實驗得到滿意的結果,在操作過程中應作到

1、每次試驗都必須設陽性和陰性對照。

2、封閉要完全。

3、洗滌要測定。

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