HiFi One-Step RT-PCR Mix說明書-分析方法-資訊-生物在線

HiFi One-Step RT-PCR Mix說明書

作者：上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (訪問量:4206)

?HiFi One-Step RT-PCR Mix

產品編號	產品名稱	規格	價格(元)	說明書
XY9405A	5×HiFi One-Step RT-PCR Mix	250T	1,000	?

本試劑采用穩定高效的RT-PCR預混體系，是以RNA為模板進行一步法RT-PCR的專用試劑。其原理為用基因特異性引物進行反轉錄反應，獲得第一鏈cDNA（不可使用Oligo（dT）或Random Rimer合成第一鏈cDNA），再使用基因特異性正向引物和反向引物進行PCR擴增，在同一反應體系中一步完成從反轉錄到PCR的全部過程。反應體系中已含有電泳所需的指試劑（藍色和黃色），反應后可以直接進行電泳。
在本試劑中，將耐熱M-MLV反轉錄酶、Rnase Inhibitor、Hotstart高保真DNA聚合酶以及穩定劑等配制成50×One-Step Enzyme Mix預混液；反應Buffer、dNTP以及電泳指示染料配制成5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加簡單便，擴增產物可用于平端克隆和DNA測序。

組分

組分名稱	250T
50×One-Step Enzyme Mix	100 μl
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer	1 ml
RNase Free H₂O	1 ml×3

注意：1.50×One-Step Enzyme Mix粘度高，第一次使用之前要離心收集至反應管底部，吸取時應緩慢小心。
2.由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶，反應配制可在常溫進行，但各組分應-20°C保存。

主要特征

耐熱M-MLV反轉錄酶可在55℃反應能更好的打開復雜二級結構，只需10min即可完成逆轉錄。
DNA聚合酶為熱啟動型高保真酶，能夠有效的抑制非特異性反應且具有較高的校正活性，酶激活僅需2min。
具有寬泛的模板量兼容性，10 ng~1μg都可有效擴增。
反應過程中無需開蓋，避免了操作過程中的污染危害。

儲存

請置于-20°C，可保存2年；避免反復凍融。

實例

1.以Hela細胞總RNA為模板，使用HiFi One Step RT PCR Mix擴增不同長度的目的片段。電泳結果顯示，166bp～4128bp 的 DNA 片段都得到了良好的擴增。

基因名稱	模板使用量
gDNA：500bp、2kb、5kb、8kb、12kb	≤2kb 50ng 2kb~8kb 100ng ＞8kb 200ng
λDNA：500bp、1kb、2kb、5kb、8kb、15kb、20kb	50 ng
Hela cDNA：166bp、552bp、1574bp、1705bp、2755bp、4128bp	≤2kb 相當mRNA 50ng ＞2kb 相當mRNA 200ng

>1000 bp	1000~3000 bp	>3000 bp
55°C，10min	55°C，10min	55°C，10min
95°C，2min	95°C，2min	95°C，2min
95°C，20s 58°C，20s 72°C，30s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，1min20s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，2min 5s32cycles
72°C，2min	72°C，2min	72°C，2min

M：D10000 DNA Marker，1-7分別為：β-actin(166bp)、GAPDH (552bp)、GAPDH(960bp)、BMP2 (1574bp)、PRKN (1705bp)、TFRC (2755bp)和TFRC( 4128bp)。

2. 以Hela細胞總RNA為模板，使用不同的RNA模板量（1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg）進行HiFi One Step RT PCR Mix擴增。電泳結果顯示，三種不同長度的片段都獲得良好的擴增，過多的模板可能會抑制擴增。

960bp	1574bp	4128bp
55°C，10min	55°C，10min	55°C，10min
95°C，2min	95°C，2min	95°C，2min
95°C，20s 58°C，20s 72°C，30s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，1min20s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，2min 5s32cycles
72°C，2min	72°C，2min	72°C，2min

M：D10000 DNA Marker，1-9分別為1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg的 RNA模板擴增產物。

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