?RAPA3G Probe qPCR MasterMix (with UDG)
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| RAPA3G DNA聚合酶為第三代DNA聚合酶，該酶對dUTP具有極強(qiáng)的識別能力，在配合熱敏UDG（該酶在95℃熱變性5min后不可逆失活，不影響后續(xù)PCR反應(yīng)）的條件下能達(dá)到最佳的防污染能力。RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)是將化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)RAPA3G DNA聚合酶、反應(yīng)Buffer、dNTP、UDG等試劑組成的預(yù)混試劑，該制品中的dTTP核酸堿基完全被dUTP所取代，因此擴(kuò)增產(chǎn)物均包含dUTP，在105?copies污染物的測試條件下，Ct可推遲15個(gè)以上（污染去除>99.997%），因此該RAPA3G Probe qPCR MasterMix具有極好的防核酸氣溶膠污染性能。 RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)是一種2×濃度的單組分預(yù)混試劑，用于探針法定量PCR。該制品不含有ROX校正染料，適用于各種熒光標(biāo)記探針，并且適用于各種定量PCR機(jī)型。此外，該制品在多重定量PCR （MultiPlex qPCR）檢測表現(xiàn)出色，至少可進(jìn)行4重的定量PCR檢測。制品中的該酶經(jīng)化學(xué)法修飾，在50℃以下100%無活性，只有95度條件下加熱5min后才能完全恢復(fù)酶的活力。因此該系統(tǒng)可以有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增，極大的提高了PCR擴(kuò)增特異性。 |
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組分 |
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主要特征 |
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應(yīng)用 |
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| 基因分型、RNA轉(zhuǎn)錄的cDNA、基因組DNA、病毒DNA等定量檢測。 | |||||||||||||||
儲存 |
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| 請避光置于-20℃可保存３年。請避光置于-20℃以下可保存３年。該試劑經(jīng)30次凍融后性能無下降，因此不使用時(shí)請置于-20℃避光保存。 | |||||||||||||||
反應(yīng)實(shí)例 |
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| Fig1.首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix擴(kuò)增三種基因產(chǎn)物（GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene），然后以105拷貝的含U產(chǎn)物作為模板,分別用RAPA3G Probe qPCR MasterMix（with UDG）和RAPA3G Probe qPCR MasterMix進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)兩組之間的△Ct，結(jié)果為：這三個(gè)基因的△Ct值分別為15.3、17.1、16.2；△Ct值越大說明去除殘留產(chǎn)物的效率越高，表明該RAPA3G Probe qPCR MasterMix（with UDG）具有良好的去除殘留模板的能力。 | |||||||||||||||
A |
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B |
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C |
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D |
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E |
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| Fig2.四重引物、探針檢測。分別以nCoV S基因質(zhì)粒（藍(lán)線- FAM通道）、nCoV N基因質(zhì)粒（綠線- VIC通道）、nCoV ORF1ab基因質(zhì)粒（紅線- Cy5通道）和 人GAPDH內(nèi)參Hela cDNA(黃線- ROX通道）為模板，四對引物和四條探針在同一體系內(nèi)進(jìn)行檢測， 模板均使用10e8-100copy/Test(7個(gè)數(shù)量級)，A為四重檢測擴(kuò)增曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線，C-E為單獨(dú)每一個(gè)通道的性能展示，結(jié)果可見該RAPA3G Probe qPCR Mix在7個(gè)數(shù)量級的動(dòng)態(tài)檢測中表現(xiàn)出卓越的擴(kuò)增性能，各個(gè)通道之間區(qū)分良好。 | |||||||||||||||