做細胞培養
最怕推開CO?培養箱門的那一刻
“我的細胞怎么長這樣了”
細胞培養是一段漫長的過程，而在這個過程當中，細胞的外觀可能會發生一些變化，比如顆粒變多、細胞變圓、變大、變小、聚團、空泡等等。這些變化可能是正?，F象，也可能是狀態不好的細胞在向我們發出“求救”信號。
常見異常形態&快速診斷
- 科研人必看的細胞形態異常自救指南 -
1.顆粒增多、發黑、狀態差
圖片來源于網絡
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細胞出現顆粒增多，或培養過程中顯微鏡觀察發現小顆粒，可能為自噬產物或代謝副產物，也有可能是發生了微生物污染。
| 疑兇： 污染（細菌最常見！真菌、支原體）、細胞碎片、代謝廢物堆積、pH 異常、營養不足 / 過期。
• 自救：
立即！鏡下高倍鏡找污染（細菌游動、真菌菌絲）。
懷疑污染：果斷棄掉！徹底消毒環境。嚴格無菌操作復查。
非污染：清洗更換新鮮培養基、檢查 CO?濃度 / 培養基 pH、確認血清 / 添加劑是否失效或濃度錯誤。
2.細胞聚團
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細胞密度高時聚集形成緊湊群體，可能由低溫、劇烈震蕩或血清不合適引發。
| 疑兇：細胞-基質粘附缺陷、消化過度（胰蛋白酶活性過強）、鈣離子濃度異?；蛑гw污染。
• 自救：
消化要充分：如果細胞沒消化開（成團貼壁），別急。繼續培養24小時讓細胞恢復，然后重新消化傳代就行。下次記得多消化一會兒，并且傳完后務必在顯微鏡下看一眼，確認細胞是分散的單細胞狀態。
勤快：細胞長滿了還不傳代，長時間擠在一起，就容易結成很硬的團。這種團傳代時很難弄散，傳下去還會長出來。所以平時要勤快點看細胞密度，除非實驗需要長滿，一般長到80%左右（快滿但沒滿）就得傳代了。
本身特性：像NK-92、Jurkat這類細胞，它們本來就是聚在一起長的，這是正常現象，可別當成消化或培養出問題了。
3.空泡化
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細胞出現空泡化，通常是細胞受到損傷，藥物刺激，培養基成分不對，培養溫度、氣相等不合適的情況都可能導致空泡。
| 疑兇：藥物 / 毒素作用、代謝異常（如糖原累積）、某些病毒感染、支原體污染、血清問題。
• 自救：
排除藥物因素：是否剛加了處理？降低濃度 / 時間試試。
檢查血清：換一批次或來源的優質血清。
排查支原體：做支原體檢測！這是常見隱形殺手。
4.生長緩慢甚至停滯
| 疑兇： 血清質量差 / 濃度低、傳代比例過高、細胞老化、營養耗盡、輕微污染（如支原體）、培養箱條件不佳（溫度 / CO?）
• 自救：
檢查基礎：確認血清批次、濃度；確認傳代時細胞密度是否合適（接種密度過低？）。
優化環境：校準培養箱溫度、CO?濃度和濕度（尤其水盤）。
檢測支原體
考慮復蘇新批次低代次細胞
5.細胞皺縮
貼附能力較弱的細胞系（像293）在培養器皿表面附著不牢固，受外力震蕩時易發生收縮
| 疑兇： 低溫敏感，外力震蕩
• 自救：
通常，將其放回培養箱靜置即可恢復原有狀態。但若長時間靜置（如過夜）后細胞仍呈皺縮狀，則需重新進行消化處理。
6.細胞拉伸/纖維化
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細胞邊緣出現潰爛、長角或毛刺
| 疑兇： 細胞受到損傷或細胞生長特性，生長速度有關。
• 自救：
提升血清濃度至標準值（胎牛血清10-20%）
基質再包被
檢測細胞代次（超過代次需復蘇新批次）
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