單抗亞型為什么都是IgM?-分析方法-資訊-生物在線

單抗亞型為什么都是IgM?

作者:福因德科技(武漢)有限公司 2023-02-15T00:00 (訪問量:22074)

單抗亞型為什么都是IgM?

做單抗的朋友都不喜歡篩到分泌IgM亞型的細胞株,主要原因是IgM不溶于水,形成五聚體,純化困難,實驗者都對其避之不及;但是過五關斬六將篩選出來的抗體如果都是IgM亞型的,這個時候往往是“棄之可惜,食之扎胃”。

單抗篩選到IgM亞型,跟免疫的抗原性質,免疫佐劑,免疫程序和融合的試劑,甚至與動物本身都有很大的關系;以上的這些因素大部分是偶然性的因素,只對某些項目,或某個因素的偶然性有關系,一般來說排除的難度很大。做單抗行業的有一句話:“你篩選什么就得到什么?”,本文主要介紹如何讓在篩選階段就完美避開IgM。

單抗的篩選,特別是融合之后的初次篩選,我們應用的篩選方法基本上都是間接ELISA方法,基本流程如下:包被抗原-細胞上清-羊抗小鼠二抗-TMB底物顯色。這個過程的基本原理是,細胞上清中的抗體與抗原結合,羊抗小鼠二抗再與抗體結合;其中的羊抗小鼠二抗是針對所有亞型的小鼠抗體的,當然包括針對IgM亞型的。順著這個邏輯走下去,我們如果把二抗中針對IgM亞型的抗體去除,那么我們在篩選中就篩不到針對IgM亞型了,為了解決這個問題我們新推出的一款二抗:FrdbioRHRP標記羊抗小鼠IgGsIgM(Cat. No.SAB9010△6),使用這個二抗進行單抗篩選得到的細胞株就不會有IgM,只不過成本略微偏高;當然,如果我們指定要篩選某個亞型單抗可不可以?可以,我們就使用HRP標記羊抗小鼠獨特亞型(IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3二抗,這些二抗也是單抗抗體亞型鑒定需要用到的。

是不是有了這些二抗利器,我們的單抗篩選就是無往而不利了?顯然不是,Frdbio研發部門總結大量的案例發現,針對某些抗原的單抗無論你怎么篩選,好的抗體偏偏就是IgM,如果非要強行用HRP標記羊抗小鼠IgGsIgM篩選,可能什么也得不到,最后只能不甘心地選擇IgM。


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