雜交瘤細胞從含血清培養(yǎng)到無血清培養(yǎng)過程可采用梯度降血清法進行，馴化過程一般建議靜置培養(yǎng)，因為對于貼壁細胞來說，生長過程中搖動對其損傷較大。建議在24孔板內馴化，節(jié)約培養(yǎng)基。
1) 在24孔細胞培養(yǎng)板里，用原來含血清培養(yǎng)基將細胞培養(yǎng)至60%-70%覆蓋板底，平行培養(yǎng)6孔；
2) 吸干板孔內原培養(yǎng)基，平行培養(yǎng)的6個孔內依次加入含梯度血清的無血清培養(yǎng)基*1（血清梯度依次為10%-5%-2.5%-1.25%-0.5%-0%），每孔1.5ml培養(yǎng)基。
3) CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時，觀察細胞狀*2，找到雜交瘤細胞生長最低血清濃度耐受點。
4) 在該血清濃度下適應性培養(yǎng)1-2天；
5) 再以該血清濃度耐受點為起始，重復步驟2，步驟3，直到細胞完全適用無血清培養(yǎng)基。
6) 細胞完全適用無血清培養(yǎng)基時，此時細胞處于懸浮或者半懸浮狀態(tài)；在無血清培養(yǎng)基中擴大細胞培養(yǎng)；
7) 根據實際生產體積需要，按照105/ml的量準備細胞，當細胞數量達標后，離心置換為新鮮無血清培養(yǎng)基，調整細胞密度為105/ml，CO2培養(yǎng)箱搖床培養(yǎng)，135rpm；
8) 細胞數量翻倍后，可以補充相同體積的新鮮無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
9) 細胞培養(yǎng)至80%以上死亡，可以收集培養(yǎng)液，離心取上清，用于純化抗體。
a.無血清培養(yǎng)基里已經加入了廠家配套的細胞生長因子；
b.細胞生長密度過大時，要及時傳代稀釋掉，保證細胞合理的密度。
無血清馴化過的雜交瘤細胞株，及時擴增繁殖，凍存保種，用于后續(xù)抗體生產。
細胞保存液配方為：10% DMSO+90% 無血清培養(yǎng)基。
大部分雜交瘤細胞經過馴化，在無血清培養(yǎng)基中抗體產量可輕松達到100~300mg/L。MAC0010S