為滿足客戶對抗目標靶標物單克隆抗體的迫切需求,博奧森單抗制備團隊經過多年的系統深入研究,發現了外源細胞因子對雜交瘤形成與生長調節規律,提出 了一種全新技術方案,通過探明人類干細胞因子bFGF、HFCS對目標多肽以及靶標蛋白陽性雜交瘤形成與生長調節規律,創建了雜交瘤細胞株半固體干細胞培 養基-梯度篩選法(簡稱"兩步篩選法"),突破了常規HAT、HT培養篩選法陽性率低、隨機性大的局限。單克隆抗體制備服務最快可在100天內完成單抗制 備過程,并且保證為客戶提供2個陽性克隆以及高親和力的抗體產品。
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上海遠慕生物公司可根據客戶的不同需要提供經濟、快速而可靠的單克隆抗體制備的完整解決方案,本項技術服務包括:
??- Balb/c純系小鼠免疫;
??- 脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞的融合;
??- 抗體產生細胞的ELISA篩選;
??- 抗體產生細胞的亞克隆與擴增;
??- 指定細胞克隆的體外培養或腹水瘤接種法生產單克隆抗體。
服務周期(天)?? ?制備步驟?? ?制備說明?? ??? ??? ??? ??? ??? ??? ?
1?? ?一次免疫?? ?每種抗原免疫5只Balb/c小鼠,抗原與弗氏完全佐劑乳化?? ??? ?
22?? ? ? ????? 二次免疫?? ?抗原與弗氏不完全佐劑乳化?? ???
43?? ? ? ? ??? 三次免疫?? ?抗原與弗氏不完全佐劑乳化;
???????????????????? ? ? ?????????? 免疫一周后取血+ELISA檢測效價。??
57?? ? ? ? ?? 加強免疫?? ?單獨抗原直接免疫;
????????????????????? ? ?????????? 三天后采血(血清做陽性對照),取脾。??
60?? ? ? ? ?? 細胞融合?? ?SP2/0骨髓瘤細胞與小鼠(ELISA效價較高)的脾細胞融合?? ???
70-100?? ?HAT選擇雜交瘤細胞?? ?ELISA效價檢測篩選陽性細胞克隆
??????????????????????????????? 雜交瘤細胞的亞克隆
??????????????????????????????? 至少進行2~4次雜交瘤細胞的亞克隆,直至細胞上清的ELISA結果陽性率達到100%,將完成細胞建株?? ?。?? ?
115-120?? ?亞類鑒定?? ?對雜交瘤細胞株所分泌的抗體進行亞類測定?? ???
120? ? ? ? ?? 凍存細胞株?? ?每種抗原提供2株雜交瘤細胞?? ??? ??? ?
121-140?? ?制備腹水并純化?? ?接種細胞制備腹水、Protein A/G純化???
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