CAR-T細胞療法需要先從患者體內獲得T淋巴細胞，然后通過體外轉基因技術 transduce CAR靶向結構域。這一過程需要在細胞培養體系中得到充分的擴增，以獲得足夠的治療CAR-T細胞數量。因此，CAR-T細胞的體外擴增能力直接決定了能否獲得滿足治療需要的細胞數量。我們可以通過多次傳代培養獲得的累積細胞數、細胞擴增的倍數增加(Fold increase)以及達到設定細胞數需要的培養時間來評估CAR-T細胞產品的體外擴增能力【1】。這些指標反映了CAR-T細胞的增殖和活力,是CAR-T細胞工藝開發的關鍵性能指標之一。
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Fig1：CAR-T細胞體外擴增過程
CAR-T細胞在體內的持久性
CAR-T細胞輸注入體內后的存活時間和持久性也是功能的重要衡量指標。持久存活的CAR-T細胞可以發揮更持久的腫瘤殺傷作用。我們通常通過流式細胞術定期檢測外周血CAR-T細胞的數量變化來評估其在體內的持久性。一般輸注后1-6個月甚至更長時間都可持續檢出，檢出峰值一般出現在輸注后1-2周，峰值后的CAR-T細胞數量隨時間遞減是正常的【2】。理想的CAR-T細胞制劑應具有至少3-6個月的體內存活時間，這樣才可以保證達到滿意的治療效果。
Fig2：CAR-T細胞體內持久性相關檢測
CAR-T細胞的腫瘤靶向性能
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Fig3：CAR-T細胞阻抗檢測
CAR-T細胞的細胞毒活性
CAR-T細胞識別腫瘤并激活后，會釋放各種細胞因子和細胞毒顆粒來攻擊和殺傷腫瘤細胞。所以我們可以檢測CAR-T細胞釋放的IFN-γ、腫瘤壞死因子-α、穿孔素、顆粒酶等水平，來評價其毒殺腫瘤的細胞毒活性以及活化狀態【4】。體外我們可以通過共培養CAR-T細胞和靶腫瘤細胞,檢測上述細胞因子和毒素的含量。脫顆粒實驗也可以直觀反映CAR-T細胞釋放穿孔素和顆粒酶的水平，這些都是評價CAR-T細胞產品殺傷活性的重要指標。
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Fig4：CAR-T細胞擊殺靶細胞能力檢測
CAR-T細胞的記憶能力
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Fig5：CAR-T細胞長久持久性檢測
CAR-T細胞治療的安全性評價
Fig6：CAR-T細胞治療B-NHL的CRS分級
T細胞耗竭水平
不同的磁珠添加比例下，T細胞激活培養14天后檢測LAG3和PD1的表達水平，?ActSep?與競品基本持平，3：1的磁珠與細胞比例下，ActSep?耗竭指標表達更低。此外，在Day 5去除磁珠，將進一步降低T細胞的耗竭水平。
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檢測ActSep?分選激活后，不同培養時間點T細胞亞型的變化。Tcm占比在培養過程中升高，隨著培養時間延長Teff與Tem比例有所升高。
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關于同立海源
北京同立海源生物科技有限公司，成立于2011年，專注細胞和基因治療（CGT）上游GMP級原料試劑研發，致力于為生命科學提供可靠的產品與服務。產品涉及細胞分選磁珠試劑，真核/原核重組蛋白、無血清培養基、細胞培養試劑盒、轉染試劑、基因編輯工具酶等。為細胞和基因治療藥物、抗體藥物開發、細胞儲存等生物制藥和IVD領域提供核心原料試劑與服務。
北京同立海源生物科技有限公司的全資子公司北京景達醫療器械有限公司建有2000㎡的研發實驗室及GMP級潔凈車間，包括真核與原核蛋白表達工程平臺、細胞培養技術開發平臺、體外診斷試劑生產平臺，通過ISO13485和ISO9001雙認證，部分產品已獲美國FDA DMF備案。
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