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發表SCI｜這 18 支抗體可幫你完成小鼠MSC細胞的鑒定

作者：北京博奧森生物技術有限公司 2021-12-24T09:10 (訪問量:4200)





Bioss被引用產品：
文中采用了我公司19個產品，其中18個抗體產品用于實驗中提取并培養的小鼠MSC細胞的鑒定：WB、免疫組化及免疫熒光染色，1個產品用于細胞核染色，使實驗順利進行。進一步佐證了基質剛度對巨噬細胞脂質代謝有直接的機械影響，并為SPMs在骨再生中的臨床應用提供了新的見解。


文章信息


發表期刊：Materials Science & Engineering C-Materials for Biological Applications

影響因子 (IF) ：7.327

文章名稱：Matrix stiffness regulates bone repair by modulating 12-lipoxygenase-mediated early inflammation（點擊獲取全文）

作者：Dongdong Yao

作者單位：重慶大學

本文應用 Bioss 產品：

1.Anti-CD11b | bs-1014R
2.Anti-CD34 | bs-0646R
3.Anti-Integrin beta 1/CD29 | bs-20630R
4.Anti-CD44 | bs-4916R
5.Anti-CD45 | bs-4819R
6.Anti-CD90 | bs-20640R
7.Anti-CD105 | bs-0579R
8.Anti-Integrin beta 1 | bs-0486R
9.Anti-IL-4 | bs-0581R
10.Anti-IL-6 | bs-0782R
11.Anti-IL-10 | bs-0698R
12.Anti-TNF alpha | bs-0078R
13.Anti-12-LOX | bs-3874R
14.Anti-iNOS | bs-0162R
15.Anti-beta-Actin | bsm-33036M
16.Anti-osteopontin | bs-0026R
17.Anti-Osteocalcin | bs-0470R
18.Anti-FITC | bs-0366R
19.DAPI | D-9106











文章摘要
巨噬細胞的脂質代謝在發揮抗炎作用和加速骨折愈合中起到重要作用。12-LOX (12-脂氧合酶) 在包括巨噬細胞在內的多種細胞類型中表達，PUFAs（氧化多不飽和脂肪酸）產生促炎和抗炎脂質介質，其中 n-3 PUFAs 在組織穩態及纖維化中起重要作用。雖然有研究發現機械因素能調節炎性細胞的脂質代謝軸，特別是基質硬度會影響巨噬細胞代謝反應，但對基質硬度如何影響骨修復中 12-LOX 介導的早期炎癥尚不明確。本研究通過控制脫鈣時間0小時（對照組）、1小時（高）、12小時（中）和5天（低）來構建具有不同基質硬度的 DBM（脫鈣骨基質）支架，以修復缺損的大鼠顱骨。分析炎癥細胞因子的表達和巨噬細胞的極化，檢測基質剛度調節的脂質代謝產物和脂質介質的生物合成。
圖1. 炎癥促進骨修復、骨重建 圖片來源：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2214031X17300128 侵刪



研究背景

由創傷、感染和腫瘤引起骨缺損的機制很復雜，目前尚未被完全了解。骨缺損早期炎癥能夠促進血管化，晚期炎癥能夠促進骨修復。但過度發炎會加速骨組織的破壞和吸收，所以炎癥消退有維持骨組織穩態的重要作用。

巨噬細胞在骨再生過程中的早期炎癥中有著重要作用，如清除有機碎片和重建細胞外基質 (ECM)。研究發現，由脂質代謝軸產生的專門的促分解脂質介質 (SPMs) 有助于炎癥的緩解。巨噬細胞中的脂質代謝可產生游離脂肪酸，如 n-3 多不飽和脂肪酸 (n-3 PUFAs)，可促進小鼠骨折愈合，對關節炎和牙周炎也有良好的治療作用。
在巨噬細胞中表達的 12-LOX (12-脂氧合酶) 是 LOX（脂氧合酶）家族的成員，能夠將花生四烯酸 (AA) 和其他多不飽和脂肪酸 (PUFAs) 催化代謝為脂質介質。研究表明 12-LOX 能夠影響骨密度，促進巨噬細胞活化，是治療骨折、骨質疏松癥和動脈粥樣硬化性血栓形成等疾病的新靶點。12-LOX 是 MaR1 生物合成的關鍵酶，在炎癥調節中起關鍵作用，并具有抗血栓形成的作用。
目前已經證實隨著組織穩態/纖維化的發展，機械因素可以調節炎癥細胞的脂質代謝軸。有研究表明，伸展運動（如太極、瑜伽）可以降低血液中 IL-6（白細胞介素-6）的水平。通過張力負荷模型發現，張力可以通過增加大鼠結締組織中促分解脂質介質的水平來減緩中性粒細胞的遷移并減輕急性炎癥。此外，異常的阻力運動可在 24 h 內升高人血清中二十碳三烯酸 (EPA)、血管緊張素轉換酶 1(RVD 1)、E1 分解素 (RvE1)、白三烯和前列腺素 (PG) 的水平。綜上所述，機械因素可能激活巨噬細胞中的 12-LOX 通路，從而影響脂質介質的生物合成。
巨噬細胞作為脂質前體的儲存庫，能夠產生脂質介質。巨噬細胞受化學刺激因子的調節，生物材料的物理性質（如形貌、孔徑）能夠影響早期骨修復中的巨噬細胞亞型。骨是膠原纖維和羥基磷灰石的復合物，其基質硬度不僅能維持骨生物力學性質、穩定性，還能調節內源性間充質干細胞 (MSCs) 的成骨作用。并且基質硬度會影響巨噬細胞的極化狀態、彈性和吞噬功能。雖然巨噬細胞對底層基質硬度的功能表型反應可能在骨修復中起著至關重要的作用，但關于基質硬度如何影響 12-LOX 介導的早期炎癥，目前尚不明確。

因此，可以假設 12-LOX 通路能通過影響巨噬細胞的行為，在基質硬度調節的早期炎癥過程中促進成骨。研究表明，不同基質剛度的脫礦骨基質 (DBM) 支架可以滿足骨移植的需要。然而，從巨噬細胞代謝反應的角度來看，基質硬度是調節炎癥反應信號的方法尚不明確。因此，該研究旨在探討基質剛度如何通過調控 12-LOX 介導的早期炎癥調節骨修復。

實驗設計
小鼠 MSC 細胞及 264.7 細胞經過分離、培養和鑒定后用于本實驗。制備不同基體剛度 DBM 支架用于本實驗。構建直徑為 5 毫米、厚度為 2 毫米的支架用于細胞實驗；構建直徑為 5 毫米、厚度為 1 毫米的支架用于動物實驗。將大鼠分組后進行實驗，每組至少 3 只，將所有大鼠隨機分為以下 8 組：純脫細胞骨支架（對照組）、高基質剛度支架（高）、中基質剛度支架（中）、低基質剛度支架（低）、自體移植物組、自體修復組和正常組。大鼠麻醉進行剃須和消毒后，在大鼠顱蓋上方的顱骨中線處做一個 1.5 厘米的切口。角質層、皮下筋膜和骨膜被一層一層剝離，露出顱骨。大鼠顱骨缺損模型通過在顱骨斜縫兩側鉆孔。完成后，骨膜直接與皮膚縫合。連續 3 天肌肉注射 400,000 U/kg 的青霉素，術后 1 天、3天、7 天、14 天和 3 個月處死大鼠進行動物實驗分析，建立大鼠顱骨缺損模型。對制備好的實驗樣本進行 WB（蛋白質印跡法），Immunological staining（免疫染色），Alkaline phosphatase (ALP) assay（堿性磷酸酶測定），Histological staining（組織染色），High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometery (HPLC-MS/MS)（高效液相色譜-串聯質譜法）分析。
圖2. 掃描電子顯微鏡 (SEM) 下的 DBM 支架視圖

圖片來源：https://www.researchgate.net/figure/Gross-view-and-SEM-examination-of-the-DBM-scaffold-A-Gross-view-of-the-DBM-scaffold_fig1_321846235 侵刪




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