?腺病毒病毒上清感染細胞的方案
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第一天? 目的細胞鋪板(以24孔板為例)
將細胞狀態良好的目的細胞(293T細胞為例),用0.25%胰酶消化下來,把細胞濃度調整為3.0*105cells/孔接種于24孔板,按500ul/孔培養基加入。
接種目的細胞的數量因細胞生長速度而有所不同,一般保證在第二天進行病毒感染時細胞匯合度達到90%~95%之間為宜。
第二天? 病毒感染
1 計算所要添加的病毒量
V(ml)=MOI*細胞數量/病毒滴度
以MOI=5,細胞數為3.0*105cells,病毒的滴度1.5*108ifu/ml為例
所需要加的病毒的體積為:
V=5*3.0*105cells/1.5*108
??= 1*10-2ml
備注:如果所加的病毒量低于2.0ul時,則需要稀釋病毒原液后,再加病毒液體。
2 病毒感染
取出24孔板中舊培養基,加入無血清的含有所需要病毒量的培養基500ul(400ul+100ul稀釋的病毒液體)。
3 換液
感染實驗同一天,2h后,棄去上清,換成10%血清的培養基,500ul/孔。
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