Elisa試劑盒雙位點一步法的原理、應(yīng)用于注意事項
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雙位點一步法的原理
Elisa試劑盒雙位點一步法應(yīng)用識別抗原不同位點2個單克隆抗體（McAb）作雙抗體夾心法測定。包被一個McAb后，同時加入待檢抗原和另一個McAb酶標(biāo)物，待檢抗原上的2個抗原決定簇同時與固相McAb和酶標(biāo)McAb結(jié)合，形成固相McAb-待檢抗原-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加底物通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測定。
雙位點一步法的操作步驟
1、將1個McAb與固相載體連接，形成固相McAb。洗滌除去未結(jié)合物。
2、同時加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標(biāo)McAb反應(yīng)形成雙抗體夾心復(fù)合物。洗滌除去未結(jié)合物。
3、加底物顯色。
雙位點一步法的應(yīng)用
適用于雙抗體夾心法的Elisa試劑盒，有些也可用雙位點一步法檢測。如HBsAg同樣可用此法進(jìn)行檢測，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清（或血漿），同時加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的另一個抗HBs（酶結(jié)合物），如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加入底物，通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結(jié)合物，加底物后就不顯色。
雙位點一步法的評價
由于應(yīng)用McAb，雙位點一步法具有很高特異性，一步法省時、簡便。
當(dāng)待檢抗原濃度過高時，大量過剩抗原分別飽和固相McAb和酶標(biāo)McAb而抑制夾心復(fù)合物的形成，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect），可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。可將待檢標(biāo)本稀釋后再做或提高抗體試劑的親和力、濃度、純度定以消除鉤狀效應(yīng)。
Elisa試劑盒雙位點一步法的原理、應(yīng)用于注意事項
作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司 2016-08-05T00:00 (訪問量:8538)
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