?Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer
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| 對(duì)目的蛋白進(jìn)行檢測分析時(shí)，總蛋白的提取至關(guān)重要，如蛋白提取不好會(huì)導(dǎo)致后續(xù)試驗(yàn)的不理想甚至失敗，如：信號(hào)極弱或無雜交信號(hào)、背景高、非特異性條帶多等.根據(jù)目標(biāo)蛋白的類型和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用種類來選擇合適的RIPA裂解液，才能最大程度地保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功。
Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer對(duì)細(xì)胞有一定的裂解能力，能獲得較多的胞漿蛋白，而對(duì)細(xì)胞核的裂解能力有限，不能完全裂解細(xì)胞核，因此獲得的總蛋白適用于IP或CO-IP實(shí)驗(yàn)；而WB Super RIPA Lysis Buffer對(duì)動(dòng)物組織和細(xì)胞的裂解能力極強(qiáng)，它可以完全裂解細(xì)胞核和線粒體，并可提取到更多的膜蛋白，從而可獲得更多的總蛋白。因其超強(qiáng)的裂解能力，使得大量的基因組DNA從細(xì)胞核中釋放出來，使蛋白變的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶消化可有效解決。經(jīng)RIPA裂解液獲得得蛋白可用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度；使用Bradford法測定由本裂解液裂解所得到樣品的蛋白濃度會(huì)稍有誤差。 |
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| 1.可很好的釋放胞漿蛋白，部分釋放膜蛋白和核蛋白。 2.經(jīng)Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer，核蛋白與DNA還緊密 結(jié)合在一起，離心后會(huì)造成核蛋白的丟失。 3.對(duì)于膜蛋白，Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破壞力 小，不能使膜蛋白與膜充分分離，故離心后造成膜蛋白 的丟失。 4.在提取蛋白過程中，基因組DNA釋放使得蛋白提取液 變的十分粘稠，影響蛋白電泳和雜交效果。 |
? | 1.可以很好的裂解細(xì)胞膜及細(xì)胞核，從而更好的完全釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白。 2.對(duì)于核蛋白，經(jīng)WB Super RIPA Lysis Buffer裂解后，核蛋白與粘稠的基因組DNA分離，離心后核蛋白存在于上清中，核蛋白的捕獲率高達(dá)90%。 3.對(duì)于膜蛋白，WB Super RIPA Lysis Buffer可最大程度的破壞細(xì)胞膜和變性蛋白，使蛋白與膜分離，防止蛋白與膜復(fù)合物在離心后沉淀，從而防止蛋白丟失。 4.在提取蛋白過程中，基因組DNA釋放使得蛋白提取液變的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶消化可有效解決。 |
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儲(chǔ)存 |
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| 置于室溫陰涼處，可保存2年。 | |||||||||||||||||
實(shí)例 |
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| Fig.用WB Super RIPA Lysis Buffer和Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer分別提取核蛋白PPARγ和膜蛋白PLD-1，上樣量分別為40ug和10ug總蛋白，ECL發(fā)光液顯色。A/C泳道為WB Super RIPA Lysis Buffer，B/D泳道為Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer。由此圖比較分析表明WB Super RIPA Lysis Buffer能更充分的釋放核蛋白和膜蛋白，從而獲得更強(qiáng)的信號(hào)。 ? |
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