?ssDNA/RNA環化連接酶
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| ssDNA/RNA 環化連接酶為熱穩定的DNA/RNA連接酶，不依賴于ATP，可催化單鏈DNA或單鏈RNA的環化，也可催化其分子間連接，但其對單鏈DNA的連接效率更高。環化反應中，要求催化底物單鏈DNA/RNA具有5’-磷酸基團和3’-OH基團。對于大于15nt的單鏈底物，該酶都能高效的連接。該酶還可催化DNA或RNA分子與預腺苷化的DNA接頭之間的連接，另外，在ATP過量的情況下，該酶可使DNA/RNA分子腺苷化。 | |||||||||||||
組分 |
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活性定義 |
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| 60°C 1h條件下，催化1pmol 5’-磷酸化參照Oligo (55mer)完全環化所需的酶量定義為1U。 | |||||||||||||
儲存 |
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| -20℃可保存3年。 | |||||||||||||
使用注意事項 |
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| 1. 1×CircLigase Buffer: 30mM Tris-acetate (pH 7.5), 60mM potassium acetate, 1mM DTT。 2. 添加終濃度50μM的ATP可提高環化效率，高于1mM ATP濃度會抑制連接反應。 3. 對于單鏈DNA產物的連接，需要加入終濃度2.5mM MnCl2。 4. 5’端未磷酸化的底物不能用于連接，3’端無-OH的底物不能用于連接。 5. 對于含有二級或復雜結構的連接底物，可加入0.4~0.8 M Betain以提高連接效率。 6. 該酶對底物堿基具有選擇性，5’末端連接效率: G > A >>> T (U)>>> C，3’末端連接效率T(U) > A > G，當3’端的堿基為C時不能用于連接，幾乎無連接產物。 |
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實例 |
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| 應用ssDNA/RNA環化連接酶環化52nt的單鏈DNA分子后PAGE凝膠電泳，泳道1為未加環化酶，2為加入環化酶，3為環化產物加入ExoI酶消化產物。 |