Edman測(cè)序法是一種用于多肽中氨基酸序列測(cè)定的化學(xué)方法。該方法由Pehr-Edman于1960年開發(fā)。該測(cè)序法通過化學(xué)反應(yīng)依次切下蛋白N端的每一個(gè)氨基酸，再使用高效液相色譜法分別鑒定氨基酸的ID，多次鑒定出的序列信息即為最終的蛋白質(zhì)序列。
Edman測(cè)序流程
l 假設(shè)我們的氨基酸序列是MYKMRYY；
l 用異硫*酸鹽對(duì)氨基末端進(jìn)行標(biāo)記；
l 水解樣本，將被標(biāo)記的氨基酸分離出來；
l 使用高效液相色譜法（HPLC）鑒定被標(biāo)記的氨基酸；
l 然后再次標(biāo)記剩余多肽鏈中的N端；
l 重復(fù)以上循環(huán)，直到最后一個(gè)氨基酸。
百泰派克蛋白質(zhì)N端測(cè)序圖示流程如下：
Edman測(cè)序的優(yōu)勢(shì)
l 不需要對(duì)照已有蛋白質(zhì)序列庫，就能100%保證確定蛋白質(zhì)序列；
l 對(duì)于發(fā)生N端突變或者經(jīng)改造過的蛋白，仍然可以提供直接的序列測(cè)定，且更為準(zhǔn)確。
Edman測(cè)序的局限性
l 通量較低，無法對(duì)多個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行同時(shí)分析；
l 分析過程相對(duì)耗時(shí)，每個(gè)殘基測(cè)試大概需要45分鐘，且殘基測(cè)序成本高；
l 由于此測(cè)序法需要從蛋白質(zhì)N端開始，對(duì)于N端封閉的蛋白質(zhì)則無法使用該法進(jìn)行測(cè)序；
l 蛋白質(zhì)樣品量需求較大；
l 一般僅對(duì)N端氨基酸序列在50個(gè)左右的蛋白樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，精準(zhǔn)度才高，超過數(shù)量，準(zhǔn)確率和效率都會(huì)降低。
針對(duì)Edman測(cè)序的局限性的解決方法
l 針對(duì)通量低的問題，我們可以結(jié)合質(zhì)譜鑒定和Edman測(cè)序二者的優(yōu)缺點(diǎn)，取長補(bǔ)短，實(shí)現(xiàn)高通量的蛋白鑒定和序列測(cè)定。
l 針對(duì)N端封閉的蛋白質(zhì)，我們可以根據(jù)具體情況，選擇相應(yīng)的酶來去除蛋白N端的修飾，或者使用質(zhì)譜鑒定法來鑒定N端的修飾。
Edman測(cè)序的應(yīng)用領(lǐng)域
l 可用于蛋白表達(dá)產(chǎn)物的驗(yàn)證。驗(yàn)證重組蛋白插入位點(diǎn)和表達(dá)順序是否正確。
l 可用于驗(yàn)證細(xì)胞株建立和發(fā)酵過程中的蛋白產(chǎn)物。驗(yàn)證細(xì)胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物N端甲硫氨酸和信號(hào)肽是否正確處理。
l 可用于分析蛋白降解/酶切。對(duì)降解/酶切形成的新蛋白片段N端進(jìn)行分析，確定斷裂/酶切位點(diǎn)。
l 可用于De-novo測(cè)序。能夠?qū)Φ鞍讛?shù)據(jù)庫中不存在的全新蛋白序列進(jìn)行分析。