抗體的標記——FITC-文獻綜述-資訊-生物在線

作者：福因德科技（武漢）有限公司 2022-06-14T00:00 (訪問量:14801)

1. 將待標記的抗體/蛋白（濃度≧1mg/ml）對標記反應液 (90mM NaHCO3，10mM Na2CO3，126mM NaCl,pH9.0) 于4℃透析三次。

2. 將FITC(Frdbio)溶于DMSO中，濃度為20mg/ml。每次交聯使用的FITC均應新鮮配制，避光。

3. （抗體/蛋白質：FITC）=1mg:150μg的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中，邊加邊輕輕晃動使其與抗體混合均勻，避光4℃反應8h。

4. 加入5M的NH4Cl至終濃度50mM，4℃終止反應2h。

5. 將標記產物在PBS中透析4次以上，至透析液清亮。

6. 交聯物的鑒定

蛋白濃度(mg/ml)=[A280–0.31×A495]/1.4

抗體/蛋白質：FITC比例=3.1×A495/（A280–0.31×A495），該值應介于2.5～6.5之間。

7. FITC標記的蛋白應置于pH7.4的磷酸鹽緩沖液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，30%甘油，短期保存于4℃避光，長期應該-20℃避光保存。

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