逍鵬生物在此祝您，二零二一年，牛年大吉、牛氣沖天、實驗能"牛"轉乾坤。

一、人結腸癌細胞（Caco-2）

△ Caco-2 細胞（來源網絡）

人結腸癌組織源細胞（Human Colon Cancer Cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。人結腸癌組織源細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA、RNA 和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫藥產業如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。人結腸癌組織源細胞在生物醫藥領域有不可替代的作用，市場前景廣闊。
1. 用于癌癥研究，驗證由細胞株研究獲得的結果；
2. 預測個體樣本的反應和排斥性，從而選擇更有效的抗癌藥物；
3. 篩選最具選擇性或毒性的新藥化合物；
4. 作為識別靶標進行抗腫瘤藥物篩選與模型建立等。
5. Caco-2 細胞融合度達到 80%-90%，細胞表現出特征性的腸上皮細胞分化，細胞可生長聚集成片，貼壁。Caco-2 細胞表達維甲酸結合蛋白I和維甲酸結合蛋白Ⅱ，并呈角質蛋白陽性。
逍鵬生物推薦方案
無血清培養方案：
1. BIO-MPM-1 SFM 無血清培養基（貨號：05-060-1A）
2. L-谷氨酰胺（貨號：03-020-1B）
3. 血小板裂解物（貨號：PLTGOLD0100R）
培養基特點：BIO-MPM-1 培養基是一種無血清培養基，用于培養貼壁細胞，使用前需添加 2mM 谷氨酰胺。培養基是不含白蛋白的，白蛋白對細胞生長是非必需的，在某些情況下甚至會阻止細胞進行有效的粘附，因此 BIO-MPM-1 的蛋白質含量小于 30mg/L，培養基中除胰島素外不含其他生長因子和激素，不包含附著因子，使用時建議添加2%的血小板裂解物。
血清培養方案：
上皮細胞完全培養基（貨號：C3650-0100）
特點：此培養基為完全培養基，主要成分為：基礎培養基、胎牛血清、谷氨酰胺、抗生素、細胞生長因子，且里面含促生長因子和大于10%的血清，使用方便，更適宜細胞增殖。

人絨毛膜滋養層細胞（Htr8）?

△ Htr8（來源網絡）

滋養層細胞是指具有滋養功能的細胞，來自胚胎外的滋養層。滋養層細胞生長迅速，在胚囊表面形成許多毛狀突起，稱“絨毛”（Villi）。被覆于絨毛膜絨毛的滋養細胞稱“絨毛滋養細胞”。
滋養層開始只有一層扁平立方形細胞，當形成絨毛時，這層細胞逐漸分化為兩層。內層和間質接觸，以往稱“郎漢斯細胞”，現稱“細胞滋養細胞 (Cytotrophoblast)”。外層和子宮蛻膜接觸，舊稱“合體細胞”，今稱“合體滋養細胞 (Syncytiotrophoblast)”。經更進一步了解正常滋養細胞具有某些獨特的生物學特點，這些特點更接近于惡性腫瘤而非正常組織。
人絨毛膜滋養層細胞上皮樣細胞呈多角形，尺寸更為規則，貼附在基質上呈散在斑片狀生長，但較難貼壁。
逍鵬生物推薦方案
1. RPMI-1640（貨號：01-100-1ACS）
2. 10% 特級胎牛血清（貨號：04-001-1ACS）
3. 1% 青鏈雙抗（貨號：03-031-1B）

人 NK-T 細胞?

△ 人 NK-T 細胞（來源網絡）

NK-T 細胞(Natural Killer T Cell)是一種細胞表面既有 T 細胞受體 TCR，又有 NK 細胞受體的特殊T細胞亞群。NK-T 細胞能大量產生細胞因子，且可以發揮與 NK 細胞相似的細胞毒作用。
其主要特征為：
1. 共表達 T 細胞受體和 NK 細胞受體。經典 NK-T 細胞一般為 CD4+ 和 DN NK-T 細胞。其中 NK1.1 是 NK-T 細胞最主要的表面標記。
2. TCR 基因偏向性取用(Bias Usage)。與其它 T 細胞亞群相比，NK-T 細胞具有獨特的限制性表達 TCR 庫。
3. 接受 CD1d 遞呈的脂類抗原，在固有免疫中發揮作用。
4. NK-T 細胞表達的是“半恒定的”TCRαβ 肽鏈，意思是指TCRα鏈相對恒定，而 TCRβ 鏈具有多樣性。例如，人 NK-T 細胞的 TCRα 鏈均表達 Vα14/Jα18。
5. CD4 和 CD8 的表達不均一。人 NK-T 細胞可能為 CD4+CD8-、CD4-CD8+ 或雙陰性 CD4-CD8- 細胞。
逍鵬生物推薦方案
BIOTARGET-1 單核細胞無血清培養基（貨號：05-080-1A）
L-谷氨酰胺（貨號：03-020-1B）
BIOTARGET-1 無血清培養基還含有典型的多種成分，其中包括：氨基酸、葡萄糖、無機鹽、脂類、酚類、紅維生素、微量元素。
BIOTARGET-1 無血清培養基用來培養人類外周血中的單核細胞，如淋巴細胞或者周圍血液中的單核細胞。該無血清培養基含人白蛋白和轉鐵蛋白，不含生長因子或激素（除了微量的生物合成的人重組胰島素）。使用前需加入終濃度為 2-4mM 的 L-谷氨酰胺。

人正常乳腺上皮細胞（MCF-10A）?

△ MCF-10A 細胞（來源網絡）

MCF-10A 培養條件是一種成團、貼壁生長的細胞，如果狀態好的情況下，生長非?？欤毎螒B是不太規則的三角形。
MCF-10A 很難消化，消化時可用胰蛋白酶（貨號：03-046-1B）進行消化，用FBS與PBS配制成中和液（FBS 占 10%），進行中和胰酶操作。此細胞需用無血清體系才能更好培養。
逍鵬生物推薦方案
1. BIO-MPM-1 SFM 無血清培養基（貨號：05-060-1A）
2. L-谷氨酰胺（貨號：03-020-1B）
3. 血小板裂解物（貨號：PLTGOLD0100R）
培養基特點：BIO-MPM-1 培養基是一種無血清培養基，用于培養貼壁細胞，使用前需添加 2mM 谷氨酰胺。培養基是不含白蛋白的，白蛋白對細胞生長是非必需的，在某些情況下甚至會阻止細胞進行有效的粘附，因此 BIO-MPM-1 的蛋白質含量小于 30mg/L，培養基中除胰島素外不含其他生長因子和激素，不包含附著因子，使用時建議添加 2% 的血小板裂解物。

鼠胚胎干細胞?

△ 小鼠胚胎干細胞（來源網絡）

ES（Embryonic Stem Cell）細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態結構，細胞核大，有一個或幾個核仁，胞核中多為常染色質，胞質胞漿少，結構簡單。體外培養時，細胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細胞呈淡黃色。細胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細胞彼此界限不清，細胞表面有折光較強的脂狀小滴。細胞克隆形態多樣，多數呈島狀或巢狀。小鼠 ES 細胞的直徑 7μm～18μm。
小鼠 ES 細胞的分離方法基本成熟，且已廣泛應用于生命科學研究的各個領域。1981 年 Evans 首次分離得到小鼠 ES 細胞，他以手術切除受精后 2.5d 小鼠卵巢并結合激素注射干擾子宮環境，從而使胚胎延遲著床，再回收胚胎，將其體外培養于 STO 細胞滋養層上，結果得到了小鼠 ES 細胞系。Martin G R 以免疫外科法剝離小鼠囊胚滋養層細胞，得到內細胞團（ICM）并將其置于 STO 細胞滋養層上，培養基為小鼠 PSA-1 ES 細胞條件培養基，結果也得到小鼠 ES 細胞。此后，Axelord 等用微滴法得到小鼠ES細胞系；Kaufman 等用單倍體延遲著床小鼠囊胚建立同源二倍體 ES 細胞系；Wobus 等首次用原代小鼠成纖維細胞作滋養層建立了小鼠 ES 細胞系；Smith 等首次使用大鼠肝細胞條件培養基作為分化抑制物建立了小鼠 ES 細胞系。Brook F A 等進一步完善了小鼠ES細胞的分離方法，以致從許多品系小鼠包括近交系和突變系，都可獲得 ES 細胞。分離小鼠 ES 細胞并非只能從囊胚，也并非必須依賴滋養層細胞。Dhhaise 等將 52 枚 8-細胞小鼠胚胎消化成單個分裂球并培養于小鼠原代成纖維細胞滋養層上，所用培養基為 DMEM/F12，并添加 100 mL/L 的胎牛血清、100mL/L 的新生犢牛血清和 0.1mmol/L 的 2-Mercaptoethanol，5 天后，出現多個干細胞集落，消化傳代后建立了一個 ES 細胞系 MSB1。將 MSB1 注入 SCID（Severe Combined Immunodeficient Mice）小鼠，能產生包含三胚層分化物的畸胎瘤，注入 52 枚囊胚產生了 2 個活的個體（1 雄，1 雌），但雄性個體無生殖能力。Tojo 等用同樣方法從雜交小鼠（C57BL/6×DBA/2）8-細胞胚也得到了 ES 細胞。小鼠 ES 細胞具有無限增殖的自我更新能力。Suda Y 等將小鼠 ES 細胞傳 250 代以上沒有出現轉化的跡象，它們仍具有正常的二倍體核型；在生殖系嵌合體中能產生正常的配子；作為核供體能重組克隆胚胎。上述結果表明小鼠 ES 細胞是永生的 。
逍鵬生物推薦方案
無血清培養方案：
1. NutriStem? hPSC XF, Xeno-Free medium（hPSC 無血清培養基，貨號：05-100-1A）
2. Laminin 511（層粘連蛋白 LN511，貨號：LN511-0202）
3. NutriStem? hPSC XF, Xeno-Free medium for human ES & iPS Cell Culture, 開瓶即可使用的完全培養基，不含異源動物成分，添加了醫療級的人血清白蛋白（HSA：Human Serum Albumin），以適用于無滋養層培養法（Feeder-Free）。
血清培養方案：
1. DMEM 低糖（貨號：01-051-1ACS）
2. 10% 金牌胎牛血清（貨號：04-002-1）
3. ESGRO 白血病抑制因子（LIF）（60μl）
4. β-Mercaptoethanol（1.5ml）

鼠原代正常肝細胞

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△ 鼠原代正常肝細胞（來源網絡）

將小鼠肝細胞分離出來,在體外環境中作培養,并進行研究是典型的細胞造模技術。分離出來的肝細胞可以進行多種研究如細胞形態學，細胞周期，蛋白表達，基因表達，多種藥物及物理條件干預，RNA 干擾等等。小鼠干細胞屬常規的原代細胞培養，不過鼠原代肝細胞在體外大約增殖 50-60 代就會進入衰老期。小鼠原代正常肝細胞都可以穩定存活長達 10 天，幾乎不增殖。細胞形態：上皮樣，多邊形，貼壁生長。1. 建議用鼠尾膠原或明膠包被培養皿2. 添加 ITS3. 青鏈霉素，兩性霉素 B 三抗 4. 接種密度為 2x105/cm2
逍鵬生物推薦方案
1. DMEM 高糖（貨號：06-1055-57-1ACS）
2. 10% 金牌胎牛血清（貨號：04-002-1A）
3. 1% ITS（貨號：C3210-0005/C3213-0005）
4. 1%青鏈雙抗（貨號：03-031-1B）
ITS：Insulin-Transferrin-Selenite（ITS）通過補充常見營養物質，可以大幅度降低細胞對胎牛血清的需求。
在胎牛血清濃度低于 4% 的情況下，ITS 或 ITS-E 都能促進各種貼壁細胞的生長。研究表明，下列所述補充成分能被大多數哺乳動物細胞所利用。它們能促進細胞增殖，降低多種細胞對血清的需求。據文獻資料，細胞培養過程中，當 ITS 或 ITS-E 與 2%-4% 的血清一起使用時，可達到與添加 10% 血清相似的增殖效果。
1. VivaCell ITS 使用人重組胰島素，更有利于實驗趨近于臨床級。胰島素作為一種多肽激素，對哺乳動物細胞具有多效合成作用，促進葡萄糖和氨基酸攝取、脂肪生成、單價陽離子和磷酸轉運、蛋白質和核酸合成。
2. 臨床級轉鐵蛋白推動實驗更加科學合法，有助于實驗經過嚴格的臨床審批程序。轉鐵蛋白作為鐵的載體，也有助于降低氧自由基和過氧化氫的毒性水平。

REFERENCES
1. Barnes D, Serum-free animal cell culture. BioTechniques, 5: 534 (1987).
2. Barnes D, and Sato G, Cell,22:649(1980).
3. Wolpe, S.D., in Mammalian Cell Culture. J.P. Mather ed., Plenum Pres.
4. Kelley, D.S. et al., Effects of insulin, dexamethasone, and glucagon on the amino acid transport ability of four rat hepatoma cell lines and rat hepatocytes in culture. Cancer Res., 38, 4591-4601 (1978).
5. Guilbert, L.J., and Iscove, N.N., Partial replacement of serum be selenite, transferrin, albumin, and lecithin on haemopoietic cell culture. Nature, 263, 594-595 (1976).
6. Murikami, H. et al., Growth of hybridoma cells in serum-free medium: ethanolamine is an essential component. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 79, 1158-1162 (1982).
7. 塔克·馬可 瑪麗·桑德斯．免疫應答導論：科學出版社，2012：194
8. 哺乳動物胚胎干細胞研究進展 ．中國知網[引用日期2019-11-09]

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