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重組腺相關病毒（recombinant Adeno-associated Virus, rAAV）基因治療在靶器官（包括眼睛、肝臟、骨骼肌和中樞神經系統）的多項試驗中已經證明了安全性和長期有效性。在臨床前和臨床研究中，rAAV基因組拷貝數的精確滴定對于確保準確、和可重復給藥至關重要。同樣，在科學研究中，rAAV的基因組拷貝數精確滴定對于獲得有效的、穩定的、可靠的、可重復的實驗數據有著不可或缺的作用。rAAV的基因組拷貝精確滴定即為滴度，通常是通過測量衣殼蛋白或rAAV基因組來確定的。
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關于你不知道的滴度 滴度一般包括物理滴度和感染滴度。 物理滴度是指：包含病毒基因組的病毒顆粒的濃度。物理滴度是通過定量病毒基因組濃度來測量的。物理滴度不一定能表明感染滴度，rAAV的感染滴度可以根據轉導靶點而變化，也可以通過病毒溶液的凍融來改變（Lock et al., 2010）。qPCR是目前廣泛應用于rAAV載體定量分析的方法之一。 感染滴度是指：可以轉導細胞的病毒顆粒的濃度。感染滴度通常通過細胞轉導測定來定量。有研究顯示，rAAV物理滴度與感染滴度的比約為50:1（Zeltner et al., 2010）。 ? PFU、TU、VG、GC都叫滴度，傻傻分不清？ 重組病毒的滴度有很多種單位表示形式，比如PFU/mL，TU/mL，VG/mL，GC/mL等，這些差異主要是由于不同病毒特性來約定俗成的，實際應用中如何區分這些不同滴度單位? PFU/mL：是空斑形成單位，為Plaque Forming Unit per mL的縮寫，多用于腺病毒、單純皰疹病毒等容易引起細胞裂解的病毒載體的滴度標定。 TU/mL：是活性滴度單位，為Transduction Units per mL的縮寫，主要是指可以感染并進入細胞中的病毒基因組數量，常用于慢病毒的滴度測定。 因此，我們需要在課題研究過程中關注所用病毒載體的類型和滴度特性來綜合判斷。 ? 是不是rAAV的劑量越高，效果就越好？ 在一些研究中，針對rAAV衣殼或轉基因產物的免疫反應已被確定為導致表達減少或完全喪失的原因。低劑量的rAAV有可能被anti-AAV抗體，甚至低滴度的中和抗體中和，從而導致效果不明顯，然而，過高劑量的rAAV，隨著衣殼劑量的增加，使得對衣殼特異性T細胞活化，激活免疫介導從而清除轉導的靶細胞，導致治療效果喪失，甚至由于嚴重的免疫反應導致實驗對象的損失（Mingozzi et al., 2013）。 因此rAAV的滴度及使用劑量應盡量保持在一定范圍內，并不是越高越好，以保證使用的最佳效果。
圖1 載體劑量與系統載體轉染后效果之間的關系 （Mingozzi et al., 2013） ? 如何精確rAAV滴度？
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別人只追求滴度時，我們還追求更有效；
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和元生物用心做科研??
讓基因遞送觸手可及