一、篩選培養基原理
- HAT選擇性培養基
融合后的雜交瘤細胞需在含次黃嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶（T）的HAT培養基中培養。氨基蝶呤可阻斷DNA合成的主要途徑，而骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶（HGPRT）無法通過補救途徑存活；雜交瘤細胞則借助脾細胞來源的HGPRT酶存活。
二、專用血清的作用與選擇
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胎牛血清的應用
- 提供生長因子、低分子營養物（如氨基酸、維生素）及緩沖能力，減少細胞凋亡和氧化應激。
- 需選用低內毒素、高批間穩定性的專用血清，適用于難養細胞（如雜交瘤、原代細胞）。
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血清濃度優化
實驗表明，15%濃度的專用血清可顯著提高融合率，1只小鼠脾細胞融合后鋪12塊板，無需添加飼養細胞或中途換液，平均每板集落數≥3.2個3。
三、操作注意事項
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細胞融合前準備
- 骨髓瘤細胞（如SP2/0-Ag14）需提前培養至足夠密度（小鼠：1×10?/瓶）。
- 血清分裝使用，避免反復凍融污染。
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篩選后培養
融合細胞經HAT篩選后，需在含專用血清的培養基中擴大培養，并通過ELISA、抗原特異性檢測（如熒光標記法）進一步篩選陽性克隆。
四、常見問題與解決方案
- 融合率低：可能因血清批次不適配，建議平行測試多批次血清后擇優采購3。
- 細胞生長不良：優先檢查血清質量（如內毒素水平）、濃度及培養條件（溫度、CO?濃度）。
通過HAT培養基與專用血清的協同使用，可高效篩選出目標雜交瘤細胞，并保障其后續增殖需求