?HotStart mTTx DNA/RNA Polymerase
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| TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶，而逆轉錄活性較Tth DNA聚合酶大幅提高，在優化的反應Buffer中，TTx表現出卓越的RT-PCR特性，但TTx DNA Polymerase的活性仍然依賴于對PCR有抑制活性的Mn2+，這種專用的反應Buffer系統限制了TTx應用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶經電子重構架技術，改變了TTx的活性配體中心，使其在Mg2+條件下仍然具有極強的逆轉錄活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+條件下對于DNA模板和RNA模板擴增能力幾乎無偏差，這種獨有的特性使得mTTx不再受限于反應Buffer系統，增加了其應用的拓展性，使得多種類型的實驗得以實現，包括：采用單酶進行TaqMan RT-PCR、在單管相同的Buffer系統中對RNA和DNA進行多重檢測、超多重的RNA模板擴增、RNA的NGS建庫、高保真RT-PCR擴增等。 | ||||||||||||||||||||
主要特征 |
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單位定義 |
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| 一個活力單位即在在68°C條件下，30分鐘內催化10 nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。 | ||||||||||||||||||||
儲存 |
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| -20℃可保存3年，避免反復凍融。 | ||||||||||||||||||||
使用方法（以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix為例） |
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| 1. 按以下組分配制RT-qPCR反應液 2×mTTx MasterMix? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?10 μl 上游引物（10 μM）?????????????? ?????????????? ?????????????? 0.4 μl 下游引物（10 μM）?????????????? ?????????????? ?????????????? 0.4 μl 熒光探針（10 μM）?????????????? ?????????????? ?????????????? 0.2 μl RNA? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? X μl ddH2O? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? Up to 20 μl 注意：引物和探針的使用濃度可在0.1-0.8ul直接調整。 2. Direct One-Step RT-PCR程序 92℃? ? ? 5 min (熱啟動) 60℃? ? ? 5 min (逆轉錄) 92℃? ? ?10 s? 60℃? ? ? 30 s（收集信號） ?循環35-45次 注意：mTTx的最佳變性溫度為92℃，其它溫度條件都會導致試劑性能下降。逆轉錄步驟的溫度可根據實際情況在58-70℃調整。 |
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實例展示 |
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| 1. 以2019新冠病毒N基因體外轉錄RNA直接作為模板，應用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix對不同拷貝的目標RNA進行TaqMan qPCR擴增，結果表明不同拷貝數的RNA，擴增性能良好。 | ||||||||||||||||||||
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| 2. 應用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix對不同拷貝的目標DNA和RNA進行TaqMan qPCR擴增，結果表明該產品對DNA模板和RNA模板擴增幾乎無偏差，RNA模板比DNA模板更容易檢出。 | ||||||||||||||||||||
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| 3.將不同數量的Jurkat細胞直接加入到TaqMan PCR反應體系中，應用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix進行內參基因GAPDH的TaqMan qPCR擴增。 | ||||||||||||||||||||
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