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試驗原理：
??????? S-100B試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知S-100B濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將S-100B和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中S-100B的濃度呈比例關系。
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試劑盒內容及其配制：
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試劑盒成份 |
96孔配置 |
48孔配置 |
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96/48人份酶標板 |
1塊板（96T） |
半塊板（48T） |
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塑料膜板蓋 |
1塊 |
半塊 |
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標準品：2000ng/ml???????????????? |
1瓶（1.0ml） |
1瓶（0.5ml） |
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空白對照 |
1瓶（1.0ml） |
1瓶（0.5ml） |
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標準品稀釋緩沖液 |
1瓶（8.0ml） |
1瓶（4.0ml） |
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生物素標記的抗S-100B抗體 |
1瓶（8.0ml） |
1瓶（4.0ml） |
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親和鏈酶素-HRP |
1瓶（12ml） |
1瓶（5ml） |
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洗滌緩沖液 |
1瓶（20ml） |
1瓶（10ml） |
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底物A |
1瓶（6.0ml） |
1瓶（3.0ml） |
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底物B |
1瓶（6.0ml） |
1瓶（3.0ml） |
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終止液 |
1瓶（6.0ml） |
1瓶（3.0ml） |
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自備材料：
1.?蒸餾水。
2.?加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.?振蕩器及磁力攪拌器等。
4.
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樣品收集、處理及保存方法：
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1、血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原
和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血
紅
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細胞迅速小心地分離。
2、?血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、?細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、?組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
?5、?保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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操作注意事項：
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●???試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
●???實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
●???不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
●???使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
●???使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
●???底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
●???加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
●???按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
安全性：
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1.???避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2.???實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3.???不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
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試劑的準備：
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1.???標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
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2000 ng/ml |
（6號標準品） |
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
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1000 ng/ml |
（5號標準品） |
100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
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500 ng/ml |
（4號標準品） |
100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
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250 ng/ml |
（3號標準品） |
100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
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125 ng/ml |
（2號標準品） |
100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
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62.5 ng/ml |
（1號標準品） |
100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
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0 ng/ml |
（空白對照） |
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
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2.???洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
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試劑盒性能：
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1.???每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
2.???甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
3.???每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
4.???取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
5.???在450nm波長處測定各孔的OD值。
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結 果 判 斷 與 分 析：
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1、?儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、?以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的S-100B標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的S-100B含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
1.???檢測值范圍： 0-2000ng/m ?靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2.???特異性：不與其它細胞因子反應。
3.???重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
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操作步驟：
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6.???使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
7.???根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
8.???加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3、???甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水l
4、?敏感度：1.0ng/ml