上海伊普瑞生物科技有限公司專注于生物微球領(lǐng)域近十年，代理并自主研發(fā)各種粒徑，各種材質(zhì)單分散微球，包括但不限于單分散氧化硅微球，聚苯乙烯微球，PMMA微球，熒光聚苯乙烯微球，磁性微球，鏈霉親和素磁珠等。
1. 鏈酶親和素磁珠在使用磁力架時(shí)無(wú)法沉淀，如何解決？
可能樣品溶液粘度過(guò)高或者由于蛋白-蛋白相互作用，磁珠形成了聚集體。解決辦法：1.延長(zhǎng)分離時(shí)間（將管子放在磁力架上2-5分鐘）。2.裂解物加入DNase酶（0.01mg/ml）。3.將Tween 20濃度提高至結(jié)合和/或者0.05%洗滌緩沖液。4.向結(jié)合緩沖液和或洗滌緩沖液加入20mMβ-巰基乙醇。
2. 鏈霉親和素是否會(huì)從鏈霉親和素磁珠中脫落？
鏈霉親和素分子與磁珠表面共價(jià)結(jié)合；在正常的推薦條件下，脫落可忽略不計(jì) (37℃下，鏈霉親和素分子總量不到0.2%)。然而，應(yīng)該注意的是，并非所有的四個(gè)鏈霉親和素亞單元都與磁珠是共價(jià)偶聯(lián)的。通常，一個(gè)或兩個(gè)亞單元共價(jià)偶聯(lián)。鏈霉親和素與其它蛋白類似，如果加熱會(huì)變性并解聚為亞基。如果鏈霉親和素偶聯(lián)的磁珠被煮過(guò)，一些鏈霉親和素亞基可能會(huì)從磁珠上釋放出來(lái)（以單體或者聚合物形式）。共價(jià)偶聯(lián)的鏈霉親和素亞基不受這種處理的影響。當(dāng)鏈霉親和素與生物素偶聯(lián)時(shí)，鏈霉親和素—生物素復(fù)合物比單獨(dú)的鏈霉親和素更加穩(wěn)定。
3. 如果鏈霉親和素磁珠被意外冷凍了是否還能使用？
仍然可以使用，為了在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)試低溫下的穩(wěn)定性，將鏈霉親和素磁珠在 -20 ℃下放置 24 小時(shí)，然后將其轉(zhuǎn)移到室溫 (15-25℃) 下72 小時(shí)。 此凍融循環(huán)重復(fù) 4 次，并將磁珠在 2-8℃條件下儲(chǔ)存 60 個(gè)月。然后檢測(cè)了生物素結(jié)合能力，并發(fā)現(xiàn)其符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。
4. 如何優(yōu)化鏈霉親和素磁珠偶聯(lián)的磁珠結(jié)合能力？
鏈霉親和素偶聯(lián)的磁珠的結(jié)合能力具有片段長(zhǎng)度依賴性。對(duì)大分子DNA 或 RNA 片段結(jié)合能力的下降可能是由于空間位阻所致。以下是一些優(yōu)化結(jié)合能力的建議。
鹽濃度會(huì)影響生物素化核酸與鏈霉親和素磁珠的結(jié)合效率。生物素化DNA片段 (長(zhǎng)達(dá) 1 kb) 的較優(yōu)結(jié)合條件是在1 M NaCl (最終濃度) ，5°C和孵育15分鐘下實(shí)現(xiàn)的。更長(zhǎng)的DNA片段應(yīng)固定過(guò)夜。生物素化抗體應(yīng)在 pH 7.4 的PBS 緩沖液中固定，并添加 0.1% 的 BSA。
請(qǐng)確保樣品中沒(méi)有過(guò)量的游離生物素，因?yàn)橛坞x生物素會(huì)比較大的生物素化分子更快地結(jié)合鏈霉親和素磁珠。生物素化寡核苷酸應(yīng)通過(guò)反相 HPLC 或 FPLC 進(jìn)行回收，以去除樣品中的游離生物素。
我們還建議根據(jù)每個(gè)特定應(yīng)用的需要進(jìn)行滴定實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化使用的磁珠數(shù)量，因?yàn)樘囟ǚ肿拥拇笮『蜕锼鼗^(guò)程都會(huì)影響磁珠的結(jié)合能力。
5. 使用的鏈霉親和素磁珠出現(xiàn)了核酸的非特異性結(jié)合問(wèn)題。我能做些什么來(lái)減少此種情況？
保持高 pH 值和低鹽濃度，這將有助于保持核酸和磁珠上的負(fù)電荷。
6. 使用鏈霉親和素磁珠得到了高背景，如何防止這種情況發(fā)生？
背景可能是由于磁珠表面與 BSA 的非特異性結(jié)合所致，或者高背景可能是由于與鏈霉親和素的非特異性結(jié)合引起的。增加 pH 值或鹽濃度可能有助于減少結(jié)合。
7. 如果鏈霉親和素磁珠聚集，應(yīng)該怎么辦？
鏈霉親和素磁珠具有帶負(fù)電荷的表面，磁珠的表面電荷可能會(huì)導(dǎo)致一些樣品中的磁珠浮在液面上，或變得粘稠或聚集。粘性可能是由于磁珠之間或磁珠與管壁之間的靜電相互作用造成的。通常，我們建議在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，用諸如 Tween 20 去污劑的非離子去污劑洗滌磁珠。通常只需將 Tween 20 去污劑加入到磁珠中，最終濃度可達(dá)到0.1%，然后在不含去污劑的緩沖液中重懸并洗滌磁珠，就可以減少或消除這個(gè)問(wèn)題。可能需要在 Tween 20 溶液中孵育，例如在室溫下滾動(dòng)孵育 5-10 分鐘。此外，我們建議使用硅化管。這種處理很可能降低磁珠的靜電電勢(shì)。
8. 在使用鏈霉親和磁珠進(jìn)行mRNA分離后出現(xiàn)DNA污染的情況，為什么會(huì)這樣？
有以下幾種原因：1.DNA 剪切不完整。 2.雜交步驟后未完全去除樣品裂解物。
3.洗滌不充分和/或未完全去除洗滌緩沖液。 4.樣品與磁珠的比率過(guò)高。