驗證實驗設計： 設置四組平行標記反應，每組使用100 µg抗體，分別加入20 µg、50 µg、100 µg、200 µg活化HRP，嚴格遵循試劑盒說明書操作。
ELISA檢測： 抗原按100 ng/孔包被ELISA板，封閉后，將四組標記產物分別進行倍比梯度稀釋，并加入對應孔位反應。洗滌后，加入TMB底物顯色，終止后讀數。
結論： 數據明確顯示，100 µg抗體對應100 µg HRP的標記比例已足夠（即可獲得理想信號）。繼續增加HRP用量不僅無效（浪費），反而可能因過量的HRP而增加非特異性背景。
蛋白摩爾質量= 25,000 g/mol。
蛋白質量 =1 mg =0.001 9。
0.001g
=4x 10-8mol.蛋白摩爾數 = 質量/摩爾質量 =
25,000g/mol
步驟2: 計算可用的伯氨基總數
每個蛋白分子有2個伯氨基。
總伯氨基摩爾數 = 蛋白摩爾數 x每個蛋白的伯氨基數=4x10-8molx2=8x10-8mol
步驟3: 計算結合的HRP摩爾數
每個伯氨基結合一個HRP分子，因此HRP摩爾數=總伯氨基摩爾數=8x10-8mol.步驟4: 計算結合的HRP質量
。HRP質量=HRP摩爾數xHRP摩爾質量=(8x10-8mol)x(44,000g/mol)
。計算:
8x10-8x44,000=8x10-8x4.4x104=35.2x10-4g=3.52x10-3巴轉換為毫克(1g=1000 mg)3.52 x10-3g=3.52mg.