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第52-63步 ? ? 徠卡101 ? ? 組織脫水、透明、浸蠟、包埋 ? ? 從患者到病理學家，準備樣本進行診斷需要細心、經驗以及合理的流程。 ? 徠卡特地為大家整理了取材、組織脫水、透明、浸蠟、包埋以及染色等（常規、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡單地獲得實驗方案，避免錯誤的發生。 ? ? ? ? ? 步驟五十二 ? ? 使用精確的時間 ? ? ?? 正確：在染色程序中的每一步都需要是精確的時間。 ? ? ?? 錯誤：步驟時間染色要求是一致的，“如果染色時間有限”有些步驟被跳過，這可能產生不一致的結果。 ? ? 這些組織是從同一個蠟塊切下的相同厚度，使用的是相同的HE方法，只是由不同的工作人員手工染色。結果是：宏觀上都可以看到不一致的染色結果。 ? ? ? ? ? 步驟五十三 ? ? 定期監測質量 ? ? ?? 正確：定期進行內參玻片染色，以監控染色質量。 ? ? ?? 錯誤：HE染色從不使用內參玻片，在染色出現問題時，很難確認是染色試劑，染色程序或固定不良的原因。 ? ? 腎組織包括各種嗜酸細胞和保存完好的核組織元素，可以可靠的評估H染色質量。胎盤是另一種有效的陽性對照標本。 ? ? ? ? ? 步驟五十四 ? ? 規范化染色條件 ? ? ?? 正確：優化所有染色步驟：攪拌，洗滌和排水的時間。 ? ? ?? 錯誤：攪拌，洗滌和排水的時間不一致。溶劑和試劑迅速被污染。染色效果不一致。 ? ? 使用自動染色儀的好處之一是攪拌、洗滌和排水時間是一致的?？杀ＷC其他變量的可控性，這將確保良好的，一致的染色結果。 ? ? ? ? ? 步驟五十五 ? ? 確保徹底脫蠟 ? ? ?? 正確：玻片脫蠟徹底。 ? ? ?? 錯誤：玻片脫蠟有時不完全或玻片包含殘留蠟塊。可能導致無法染色，或不均勻染色區域。 ? ? 該HE染色切片顯示整個左側區域和部分幾個較小的區域，部分染色或未染色。這是由于前期不完全脫蠟導致。 ? ? ? ? ? 步驟五十六 ? ? 定期更新試劑 ? ? ?? 正確：溶劑和染色劑被定期更換的頻率，取決于處理的玻片染色或蠟塊的數量。 ? ? ?? 錯誤：隨機的更換溶劑和染色試劑。直到染色質量下降才會更換試劑。 ? ? 很差的染色質量，蘇木素染色效果很差，該試劑應立即更換。 ? ? ? ? ? 步驟五十七 ? ? 徹底水化 ? ? ?? 正確：玻片在蘇木素染色之前需要徹底水化。 ? ? ?? 錯誤：蘇木素溶液混入酒精或二甲苯，導致不均勻的染色。 ? ? 該皮膚表皮的蘇木素染色不均勻是由于殘余的二甲苯（和蠟）引起的。 ? ? ? ? ? 步驟五十八 ? ? 蘇木素質量監控 ? ? ?? 正確：因蘇木精染色液會逐步被玻片和染色架攜帶的試劑稀釋和繼續氧化，故蘇木素溶液的性能需要進行仔細的監控。 ? ? ?? 錯誤：蘇木素染色能力是每天變化的并且無法知道變化規律的。例如，染色缸的表面面積，在染色過程中的通透程度，和周圍的溫度均可影響氧化速率。 ? ? 同一蠟塊切同樣厚度的2張玻片，使用自動染色機，相同的程序，間隔七天H&E染色顯示，即使是肉眼觀察，染色效果的變化也是十分明顯的。 ? ? ? ? ? 步驟五十九 ? ? ? ? ? ??正確：蘇木精染色后，一般通過 Scott’s堿性自來水或氨水進行徹底的“返藍”。此方法受當地自來水的自然PH值影響。 ? ? ?? 錯誤：有時由于未完全“返藍”，細胞核會呈現粉紅色。細胞核在蘇木素未染（過分化）或伊紅過染也可能呈現粉紅色。 ? ? A.表皮細胞核的界限不清并被染成了粉紅色。原因是蘇木素染色后在堿性水中未恰當的“返藍”（皮膚HE）。 B.蘇木素染色后怡當“返藍”的核染色效果。這幅圖的核擁有更好的邊界（皮膚，氫和電子）。 ? ? ? ? ? 步驟六十 ? ? ? ? ? ??正確：“返藍”后的步驟需要非常徹底的清洗，以便去除自來水中殘留的堿，以防止其中的堿阻礙后續伊紅染色，引起染色淡或染色不均勻。 ? ? ?? 錯誤：不完全沖洗“返藍”（清洗后留下的殘余堿）使伊紅染色變弱或不均勻。 ? ? 剩余堿對伊紅染色的影響。注意片狀染色效果（脾HE）。 ? ? ? ? ? 步驟六十一 ? ? 伊紅PH監測 ? ? ?? 正確：對伊紅溶液的pH監測。保持最佳染色，保持PH5.0。加入醋酸可便捷的降低pH值。沒有刻意監控伊紅pH。 ? ? ?? 錯誤：當染色強度下降選擇替換溶液（堿性自來水的攜帶帶入能引起伊紅溶液的pH上升）。 ? ? 肺組織H&E染色，因伊紅染色太弱，而不可接受的染色結果。請注意，只有紅細胞部分被伊紅染色。 ? ? ? ? ? 地 址： 北京市朝陽區小營路17號一幢金盟大廈五層5-503室 聯系人： 王女士 電 話： 010-64838766-237 傳 真： 010-64842431/64838766/64838775-249 Email：wangqian@herosbio.com
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