服務介紹:
修飾性抗體制備最常見的是磷酸化抗體,乙酰化抗體,甲基化抗體制備等等,磷酸化抗體是目前應用最為廣泛,修飾抗體中的代表。
磷酸化抗體用于檢測區分蛋白磷酸化和非磷酸化,可以用于磷酸化蛋白的定性和定量分析;目前制備磷酸化抗體主要技術路線是通過設計一條磷酸化多肽以及對應的非磷酸化多肽,磷酸化多肽偶聯載體后免疫動物,如果制備多抗,被免疫動物的高免血清,先通過磷酸化多肽偶聯的親和層析填料純化,再用非磷酸化多肽的填料吸附上述純化的抗體,最終得到只針對此磷酸化多肽的抗體;如果制備單克隆抗體,磷酸化多肽偶聯載體后免疫Balb/C小鼠,細胞融合以后通過細胞上清篩選僅與磷酸化多肽反應而不與非磷酸化反應的細胞株。
磷酸化多抗制備選用兩只SPF(Specific Pathogen-Free)級日本大耳白,磷酸化單抗制備選用Balb/c小白鼠,采用完全弗氏佐劑(CFA)和不完全弗氏佐劑(IFA)皮下多點注射。
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| 所屬階段 | 服務內容 | 交付產品 |
| 1 | 設計合成磷酸化多肽?合成10mg磷酸化多肽和5mg非磷酸化多肽 | ? 2~3mg多肽(非磷酸化多肽和磷酸化多肽) ? 1~2ml免疫前血清 ? 2~5mg磷酸化抗體 ? ELISA檢測結果 ? 項目報告 |
| 2 | 多肽偶聯?合成多肽與載體蛋白偶聯(KLH,BSA) | |
| 3 | 抗血清制備?免疫兔子,免疫前采血,免疫四次并采集血清 | |
| 4 | 血清檢測?血清小樣采集和檢測 | |
| 5 | 抗原親和純化?磷酸化多肽親和純化柱,非磷酸化去除交叉反應 | |
| 6 | 質檢?ELISA檢測效價 |
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| 所屬階段 | 服務內容 | 交付產品 |
| 1 | 設計合成磷酸化多肽?合成10mg磷酸化多肽和5mg非磷酸化多肽 | ? 5mg修飾多肽、3mg未修飾多肽和抗體產品 ? ? 50ul免疫前血清 ? ? 2-5株雜交瘤細胞 ? ? 3-8mg純化抗體(2株雜交瘤)ELISA檢測結果 ? ??亞型鑒定結果 ? ??完整項目報告 |
| 2 | 多肽偶聯?合成多肽與載體蛋白偶聯(KLH,BSA) | |
| 3 | 動物免疫與檢測?免疫小鼠并用磷酸化和非磷酸化多肽進行ELISA檢測 | |
| 4 | 細胞融合?磷酸化多肽顯示出的最佳免疫應答小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合 | |
| 5 | 增殖與篩選?ELISA檢測出陽性克隆并進行亞克隆 | |
| 6 | 腹水制備及純化?腹水制備,Protein G純化 | |
| 7 | 檢測?ELISA檢測效價 |
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多種動物可供選擇,多種類型抗原可供制備;抗體效價高,普遍高于同行1-2個數量級;
多種純化系統供客戶選擇:離子鹽析沉淀法,親和純化(ProteinA、ProteinG和ProteinL)及抗原配體特異性純化;
包括片段化、生物素標記、HRP標記、FITC偶聯及Cy3標記…
