?文章源自徠卡

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前言：制備高質量的病理切片需要一定的技巧和經驗—但我們都須從頭開始學習。

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該教程的目的是協助初學者熟悉石蠟切片的制備，以及作為經驗更豐富的技術專家的進修課程。涵蓋輪轉式切片機制備石蠟切片的設置和操作相關的基本內容。同時對切片過程中的部分常見故障進行具體說明，并提供故障排除建議。

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01 正確固定標本

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固定是組織學標本制備技術中最重要的一步。即使在對組織標本進行處理和切片的過程中做到了很細致,但只有當組織被及時且充分固定時，才能顯示出組織基本形態的細節。

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1）通常情況下,相比于固定良好的標本,未進行良好固定的標本在切片時可能存在問題。

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2）對于未能良好固定的組織,即使采用最優化處理方法并仔細切片,還是有可能得到質量較差的形態學結果。

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02 正確處理組織

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采用適當的方法對已良好固定的標本進行合理的處理,才能獲得良好的組織切片。

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1）標本處理不足(標本太大、處理時間過短)或處理過度(對于標本的大小和性質而言,處理的時間過長)。這兩種情況均可能導致難以切片或者不能切片。

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2）目前有多種技術可用于從問題蠟塊中獲取切片

3）如果蠟塊因組織較硬或易碎而難以進行切片,可將其暴露面浸于冷水或柔軟劑(弱洗滌劑溶液、織物柔軟劑或 Mollifex)中。

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4)對于含鈣標本,將表面脫鈣劑應用于暴露組織10分鐘或更長時間)可以獲得幾張切片。在將蠟塊置入切片機標本架之前應對蠟塊進行良好漂洗和再切片,因為即使痕量的脫鈣劑亦將損壞刀片架的壓盤。

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5)推薦采用石蠟膠帶-傳輸系統從困難蠟塊(固定、處理或浸潤錯誤)獲取切片,因為正常的切片方法不能成功獲得切片。

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6)如果在處理過程中第一時間末對標本進行充分處理,而導致不能從蠟塊中獲取切片,那么可以對標本進行再處理。

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該胰腺蠟塊未進行充分固定，因此根據固定時間不夠的處理方案進行再處理。該圖所示為處理不足的典型案例，即導致標本在周圍石蠟中出現相當大的收縮。組織柔軟且呈糊狀因此不能進行切片，需要進行再處理。

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03 仔細包埋標本

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嵌入是非常重要的一步,需要一個成熟的方案。包埋不細致可能導切片更加困難。

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1)避免包埋盒填充不足，因為這可能導致切片機夾持不穩定，從而導致切片“厚薄不均”等現象。

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2)避免過度填充包埋盒，因為其可影響蠟塊切面的正確對齊。

3)在夾持之前，應去除包埋盒之外存在的多余石蠟，以確保蠟塊在切片過程中的穩定性。

4)標本的定位非常重要。

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填充不足(左)、填充過度(右)以及包埋盒正確填充(中)示意圖。包埋盒填充不足和填充過度均可導致切片過程中出現問題。

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04 正確定位切片機

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實驗室中切片機的位置非常重要。

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1)將切片機置于穩定工作臺上,并且應遠離通風口、門口和員工通道。來自空調的任何空氣流動或其他原因均可導致切片操作非常困難。

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2)首選高度可調的工作臺以及符合人體工程學的椅子。

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