上期我們已經學習了細胞基本形態，細胞健康及異常狀態下的特征，學會如何辨別細胞是否異常，接著從污染方面進行了深度解析。（戳此處查看原文） 但是導致細胞形態異常的罪魁禍首并不一定是污染，今天我們將從細胞培養營養體系、傳代操作、培養條件、耗材等方面進行深度的剖析。 營養體系 l 細胞名稱并不能判斷細胞是否好養 癌細胞只是“長生不老”，不代表它需要的營養可以降低，原代壽命短暫（分裂50-60次），但也不代表它對營養的需求高。 絕大多數細胞均可使用基礎培養基+血清來養，少數細胞可以使用無血清體系培養，并且未來細胞培養體系的走勢是趨向于無血清培養體系發展的。 l 細胞合適的營養體系 下面是較權威的細胞培養體系查詢網站，可供大家參考。 中國菌種庫：http://www.biobw.org/ 血清 因為細胞所需的營養因子來自于血清，因此血清的這些事兒大家也需要了解~ 成分 濃度 成分 濃度 蛋白和多肽 磷脂 0.7-3.0 mg/ml 白蛋白 20-50 mg/ml 丙酮酸 2-10 μg/ml 胎球蛋白 10-20 mg/ml 碳水化合物 纖連蛋白 1-10 ug/ml 葡萄糖 0.6-1.2 mg/ml 球蛋白 1-15 mg/ml 乳酸 0.5-2.0 mg/ml α-抗胰蛋白酶 0.5-2.5 mg/ml 多胺 轉鐵蛋白 2-4 mg/ml 丁二胺,亞精胺 0.1-1.0 uM 生長因子 尿素 170-300 ug/ml EGF, PDGF, IGF-I, IL-1 1-100 ng/ml 無機物 氨基酸 0.01-1.0 uM 鈣，氯化物，鉀，磷 脂質 激素 膽固醇 10 uM 胰島素 1-100 ng/ml 脂肪酸 0.1-1.0 uM 皮質醇 10-200 nM 亞油酸 0.01-0.1 uM 維生素 10 ng-10 ug/ml 1）血清批間差可導致細胞聚團 小鼠黑色素瘤細胞B16-F10（圖源客戶，僅供學習參考） 2）血清批間差可導致細胞形態改變，導致細胞失去原本該有的上皮樣，成纖維樣或神經母瘤樣形態，邊緣模糊潰爛或長角。 293T人腎上皮細胞系（圖源客戶，僅供學習參考） 3）血清批間差可導致胞內空泡化 l 新開了一瓶血清（貨號沒變，批號改變），復蘇或傳代后的細胞形態正常，增殖變慢，本來2天傳的，可能要3或4天傳了，可以適當加高血清比例到15%或20%（最高不能超過20%）。 l 新開了一瓶血清（貨號沒變，批號改變），復蘇或傳代后的細胞前2代還可以，然后越傳越差，形態改變，增值緩慢，一般傳到5，6代，細胞無法再繼續傳代。 l 新開了一瓶血清（貨號沒變，批號改變），復蘇或傳代后的細胞半死不活的樣子，不增殖也不凋亡。 l 新開了一瓶血清（貨號沒變，批號改變），復蘇或傳代后的細胞漂浮嚴重，貼壁性變差，凋亡嚴重。 建議先進行批號測試，篩選出合適批號，購買半年甚至一年以上的用量，避免批間差造成實驗波動（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。 1 ) 建議加高血清比例到15%~20% 2 ) 可購買ITS（4%胎牛血清+1%ITS+95%基礎培養基） 3 ) 更換血清批次 基礎培養基 成分 濃度 氨基酸 必需氨基酸 苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸和蛋氨酸（8種） 16-146 mg/L 非必須氨基酸 丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、脯氨酸、絲氨酸和酪氨酸（12種） 30-584 mg/L 無機鹽 二水氯化鈣、Ferric nitrate、硫酸鎂無水、KCl、氯化鈉、無水磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉 0.1-6400 mg/L 維生素 氯化膽堿、泛酸鈣、葉酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、鹽酸硫胺素、肌醇 0.4 -7.2 mg/L 碳水化合物 葡萄糖 1000-4500 mg/L 丙酮酸鈉 110 mg/L 其它 酚紅 15.9 mg/L l 有的細胞用不同的基礎培養基增殖效果和形態很好，沒有明顯差別。 l 有的細胞使用不同的培養基增殖效果都可以，但存在一種增殖速度與形態是最優的產品。 l 有的細胞可能只適合特定的基礎培養基，細胞對于培養基的某種條件要求比較高（比如pH緩沖性，滲透壓，微生物或葡萄糖的需求等）。 l 基礎培養基為化學合成定量生產產品，批間差幾乎不存在。 l 在未更換血清品牌及批次的前提下更換了基礎培養基，可能導致細胞復蘇或傳代后增殖變慢，不同品牌同種培養基的濃度含量也是有差異的。 l 在未更換血清品牌及批次的前提下，培養基開封4℃下放置超過一個月，在這一個月內細胞增殖速度越來越慢，有可能是谷氨酰胺降解或二氧化碳溢出導致pH值降低，培養基偏紫，因此，建議培養基開封后一周內使用完。 生長因子 作用 成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor, FGF) 促進成纖維細胞、平滑肌細胞增殖 表皮細胞生長因子（epidermal growth factor，EGF) 促進上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞的增殖 血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF） 促進血管內皮細胞增殖 白介素（Interleukin 2，IL-2） 促進T淋巴、B淋巴、NK細胞、LAK、TIL細胞增殖 重組胰島素（Insulin, BI:01-818） 胰島素能刺激眾多的細胞增殖與分化 牛垂體提取液（BPE) BPE是無血清的促有絲分裂添加劑,含有天然生長因子的獨特混合物,可促進上皮、干細胞等增殖 氫化可的松（hydrocortisone） 促進特定細胞增殖如人正常乳腺上皮細胞 霍亂霉素（choleratoxin） 促進特定細胞增殖如人正常乳腺上皮細胞 牛血清白蛋白（BSA) 主要用于無血清培養基中，白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用 B27 神經細胞培養無血清添加劑，適用于大鼠海馬和皮質神經元的長期培養 傳代操作 傳代過程中胰酶消化過程會影響細胞，導致出現聚團現象。 小鼠黑色素瘤細胞B16-F10（（圖源客戶，僅供學習參考） 復蘇的原代細胞增殖良好，一旦傳代就出現聚團，除圖例中的，還有間充質干細胞尤其“喜歡”聚團現象。 這時需要考慮一下幾點： 普通胰酶（0.25%胰蛋白酶，0.02%EDTA)純度不夠高，含有的雜酶，比如羧肽酶對細胞有傷害，像神經元類會比較敏感，比如小鼠海馬神經元HT22。 消化不足，細胞粘連在一起，吹打時細胞成片脫落，容易聚團； 消化過度，細胞消化嚴重，破損的細胞碎片容易粘連聚團。 吹打過猛，細胞機械損傷大，細胞聚團明顯。 培養條件 哺乳動物是37℃，昆蟲細胞是28℃。 通過向水盤加水，讓水分蒸發，濕度達到95%。 CO2既是細胞代謝產物，也是細胞所需成分，它主要與維持培養液的pH有直接關系。 耗材 培養瓶的主要成分是 polystyrene（PS），其表面是疏水的，一次性細胞培養皿等標明Tissue culture treated，是表明該器皿經過表面的改性處理，適合貼壁細胞的培養。 不止一位用戶培養細胞，細胞呈現成片增殖，密度不均勻，空白地方“寸草不生”，這個時候極有可能是耗材改性處理不當或不均勻所致。 歡迎關注公眾號留言咨詢，給您最合適的解決方案~ 了解詳細信息可戳原文，轉載請標明出處。
細胞對于營養體系是有需求差異的
02 血清批間差
血清來源于動物，其組成成分有1000多種，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養條件而變化。因此，每個批次的組分百分比含量都是不固定的，批間差異是不可避免的。
03 細胞對于血清批間差敏感有以下表現：
預防
03 細胞對于基礎培養基敏感表現
04 特殊細胞對于生長因子的需求
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細胞形態異常剖析 Step2
作者：上海逍鵬生物科技有限公司 2021-09-07T17:24 (訪問量:14419)
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