細胞房消毒方案-讓您的細胞高枕無憂-技術前沿-資訊-生物在線

細胞房消毒方案-讓您的細胞高枕無憂-技術前沿-資訊-生物在線

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細胞房消毒方案-讓您的細胞高枕無憂

作者：上海逍鵬生物科技有限公司 2021-07-28T10:14 (訪問量:16523)

細胞形態異常主要原因有哪些？我們應該從哪些方面出發考慮，逍鵬生物以魚骨模型為大家列舉了六大考慮因素，今天我們將帶領大家分析人為操作/環境因素。（點擊此查看魚骨圖）

人為操作和環境我們大致可以從以下幾點進行考察分析：

操作人員、細胞房、生物安全柜、顯微鏡置物臺、二氧化碳培養箱、水浴鍋、震動、滅菌鍋。

人源污染及預防

從人身上掉落的顆粒達到10⁴/分鐘（顆粒直徑0.5μm）

人類1小時會脫落3*10⁴-4*10⁴個細胞；1年大概會脫落3.6kg的死細胞。

人類的皮膚總面積約2m²，存在約10¹²個微生物；我們1g的排遺物中約有10¹²個微生物。

-摘自上海高中生物第四冊第一章微生物

人源污染

那么我們如何避免這些呢？接下來繼續探討~

1. 細胞房著裝要求

操作細胞培養物前后應洗手，穿戴個人防護設備不僅可保護您免受危險品污染，還可降低皮屑以及衣服上污物和灰塵污染培養物的可能。

正確的穿衣順序：

① 換專用鞋
② 無塵手套（避免不潔的雙手經穿著時沾附于無塵衣上）
③ 網帽（帶網帽時須確保頭發不可暴露于網帽外，之后戴口罩遮住口鼻）
④ 無塵服（不要穿棉質衣服(脫落纖維)）
⑤ 鞋套

德克龍(聚酯)

2. 超凈臺試劑布局

超凈工作臺或安全柜里的物品擺放一般遵循以下右手使用習慣，并可根據特殊實驗中增加物品進行相應的改動。

① 在工作臺中部開闊區域放置細胞培養容器；

② 移液器置于右前方易于取用的地方；

③ 試劑和培養基置于右后方，便于吸??；

④ 試管架置于中后部，用于固定其他試劑；

⑤ 小型容器置于左后部，用于盛放廢液。

適合慣用右手的工作人員的工作臺基本布局。慣用左手的工作人員可相應地調整工作臺面上物品的擺放位置。

3. 人為操作技巧

- 小心取用無菌實驗物品，勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，也不要在打開的容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
- 每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同也不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以75%酒精擦拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。
- 離心管、凍存管等容器需用抗酒精的標記筆標示內容物名稱、操作日期、操作人員姓名。若是細胞傳代培養，更需注明目前的代數，以及這是同一代中的第幾盤。

細胞房布局技巧

1. 細胞房功能分區

理想的無菌操作室應劃分為三部分：

a) 更衣室---放在外，主要提供更換衣帽，鞋子，口罩，手套等。

b）緩沖室---位于更衣間與操作間之間，也可同時和幾個操作間相通。目的是保證操作間的無菌環境，同時可放置恒溫培養箱及某些必需的小型儀器。

c）操作室---放在內間，分為無菌操作室、培養室、準備室、清洗室、消毒滅菌室、儲存室。

房間設置要求：各個房間高度適宜（不超過2.5m），頂部過高會影響紫外線的滅菌效果；大小適當，房間過大，清掃和消毒不便；過小，操作不便；墻壁應光滑無死角，以便清洗和消毒。

2. 細胞房設計原則及條件

設計原則：防止微生物污染和有害因素影響。

條件要求：封閉、正壓：隔離門和空調系統

溫濕度：培養箱內是37℃，飽和濕度；室內是溫度18℃-26℃，濕度是45%-65%。

潔凈度：空氣潔凈度等級是潔凈空間單位體積空氣中，以大于或等于被考慮粒徑的離子最大濃度限值進行劃分的等級標準。潔凈度等級應在空態、靜態和動態放大進行測試，使用塵埃粒子測試儀來測定。

3. 細胞房布局原則

摘自：《Culture of Animal Cells》

細胞房維護保養：

1. 每天檢查并記錄細胞房溫度、相對濕度（細胞房溫濕度記錄表)，發現異常要及時報告并處理。

2. 生物安全柜或超凈臺維護：每年委托有資質第三方對生物安全柜或超凈臺進行風速、氣流流型、高效測漏、塵埃粒子、沉降菌的檢測。

日常維護：定期對生物安全柜或超凈臺進行塵埃粒子、沉降菌或浮游菌的測試，發現不合格及時更換濾網或進行維修。

3. 空調系統維護: 定時更換初中效過濾器，每年請有資質第三方對潔凈室進行塵埃粒子、沉降菌或浮游菌、換氣次數、高效測漏、壓差等檢測。

日常維護：按照要求定期監測塵埃粒子、沉降菌或浮游菌。

細胞房消毒方法

1. 細胞培養箱防菌試劑

Pharmacidal （IC-110100）

主要成分：Pharmacidal 是由篩選過的有機氮化合物組成，主要組成成分為：芐基二甲基辛基氯化銨、芐索氯銨、三羥乙基胺，并添加丙二醇等清潔消毒劑。

作用原理：Pharmacidal作用方式是使脂質變性，分解細胞膜的雙層磷脂質和增加細胞通透性，導致酶的滅活，蛋白質沉淀，與DNA和RNA產生反應。

特點： Pharmacidal 對大部分的細菌、芽孢、支原體、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒都有效。

使用方法：

可消毒橡膠手套、超凈臺面、桌面、顯微鏡臺、試劑瓶身等物體表面，噴涂完全濕潤，不需擦拭，自然風干。
培養箱內壁噴涂完全濕潤后，等待10分鐘后，用無菌吸水紙吸干內壁上的殘留液體。

2. 水浴鍋、水盤防菌試劑

Aquaguard-1 Aquaguard-2

貨號：01-867-1B 貨號：01-916-1B

主要成分：苯甲酸鈉主要成分：2-溴代-2-**-1,3-丙二醇

Aquaguard-1

用來消毒培養箱中的水盤，可有效殺滅細菌、芽孢、支原體、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒；無毒；對不銹鋼無腐蝕性；不揮發。

用法：

1. 建議每兩周進行一次系統的清潔和消毒培養箱。

2. 稀釋100倍即可使用，即將1L水中加入10ml的Aquaguard-1溶液。

Aquaguard-2

用來消毒水浴鍋，可有效殺滅細菌、芽孢、支原體、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒。

用法：

1. 建議每周進行一次系統的清潔和消毒水浴鍋。

2. 稀釋500倍即可使用，即將1L水中加入2ml的Aquaguard-2溶液。

3. 超凈臺、桌面、試劑瓶身消毒方案

滅菌方法	作用原理	優點	缺點
Pharmacidal 噴壺	季銨鹽作用方式是使脂質變性。分解細胞膜的雙層磷脂和增加細胞通透性，導致酶失活，蛋白沉淀，與DNA和RNA產生反應，可有效防止真菌、細菌（和芽孢）和包膜病毒（包括HIV等RNA病毒）的污染和生長。	滅菌徹底；無毒無害；無刺激性；無腐蝕性；可生物降解	不能與肥皂或其他陰離子洗滌劑同用，也不能與碘或過氧化物(如過氧化氫、磺胺粉等)同用，否則會抵消其作用。
酒精	乙醇的抗菌原理是使蛋白質變性	高效滅菌；價格實惠	易揮發，作用時間短；有刺激性；易燃
新潔爾滅（苯扎溴銨）	季銨鹽類消毒劑屬于陽離子表面活性劑，能吸附帶陰離子的細菌并破壞細菌的細胞膜，增加細菌胞漿膜通透性, 使菌體胞漿物質外滲,阻礙其代謝而起到殺滅作用。	可殺滅常見細菌、真菌；刺激性低；無腐蝕	不能與肥皂或其他陰離子洗滌劑同用，也不能與碘或過氧化物(如過氧化氫、磺胺粉等)同用，否則會抵消其作用。
來蘇爾	酚類可裂解并穿透細胞壁，使菌體蛋白凝集沉淀，快速殺滅細胞。	可殺滅常見細菌、真菌	刺激性強，易使橡膠制品變脆變硬
滴露	酚類可裂解并穿透細胞壁，使菌體蛋白凝集沉淀，快速殺滅細胞。	可殺滅常見細菌、真菌	刺激性強，易使橡膠制品變脆變硬

4. 細胞房空氣消毒方案

滅菌方法	作用原理	優點	缺點
紫外線燈殺菌	波長在220-300nm的紫外線稱為“殺生命區”，其中以260nm的殺菌力最強。紫外線作用于細胞DNA，使DNA鏈上相鄰的嘧啶形成嘧啶二聚體（如胸腺嘧啶二聚體），抑制了DNA復制。	能有效殺滅常見的微生物如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌	穿透力差；有死角；與被照物的距離以不超過1.2m為宜；致癌
甲醛熏蒸	它能與蛋白質中的氨基酸結合而使蛋白變性，使酶的活性消失。	滅菌徹底；不易燃、不爆炸，不腐蝕金屬	殘留性大；致癌
過氧化氫干霧滅菌	通過復雜的化學反應解離具有高活性的羥基作用于細胞膜，其強氧化性破壞組成細菌的蛋白質，使之死亡。	滅菌徹底；殘留性小	有腐蝕；易爆；致癌
臭氧滅菌	高壓電場使電子管的內外電極發生強烈電子轟擊，導致空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧不穩定，很快自行分解成氧氣（O2）和單個氧原子（O）；后者具有很強的活性，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應，從而靠氧原子的彌漫性擴散達到殺菌之目的。	滅菌徹底；殘留性小	費用較為昂貴
空氣過濾（恒溫恒濕裝置）	逐次使用不同孔徑的濾膜將微生物過濾干凈	除菌效果高；無毒	費用較為昂貴

5. 細胞房地面消毒方案

滅菌劑	作用原理	優點	缺點
Pharmacidal 噴壺	季銨鹽作用方式是使脂質變性。分解細胞膜的雙層磷脂和增加細胞通透性，導致酶失活，蛋白沉淀，與DNA和RNA產生反應，可有效防止真菌、細菌（和芽孢）和包膜病毒（包括HIV等RNA病毒）的污染和生長。	滅菌徹底；無毒無害；無刺激性；無腐蝕性；可生物降解	不能與肥皂或其他陰離子洗滌劑同用，也不能與碘或過氧化物(如過氧化氫、磺胺粉等)同用，否則會抵消其作用。
84消毒液	84消毒殺菌最主要的作用方式是通過它的水解作用形成次，次再進一步分解形成新生態氧[O]，新生態氧的極強氧化性使菌體和病毒的蛋白質變性，從而使病原微生物致死。	滅菌徹底；殘留性?。粌r格便宜	有腐蝕
新潔爾滅（苯扎溴銨）	季銨鹽類消毒劑屬于陽離子表面活性劑，能吸附帶陰離子的細菌并破壞細菌的細胞膜，增加細菌胞漿膜通透性, 使菌體胞漿物質外滲,阻礙其代謝而起到殺滅作用。	可殺滅常見細菌、真菌；刺激性低；無腐蝕	不能與肥皂或其他陰離子洗滌劑同用，也不能與碘或過氧化物(如過氧化氫、磺胺粉等)同用，否則會抵消其作用。
來蘇爾	酚類可裂解并穿透細胞壁，使菌體蛋白凝集沉淀，快速殺滅細胞。	可殺滅常見細菌、真菌	刺激性強，易使橡膠制品變脆變硬
滴露	酚類可裂解并穿透細胞壁，使菌體蛋白凝集沉淀，快速殺滅細胞。	可殺滅常見細菌、真菌	刺激性強，易使橡膠制品變脆變硬

細胞污染殺除試劑

細菌克星-抗生素

貨號	抗生素	作用對象	使用比例	儲存條件
03-049-1B	卡那霉素溶液（10mg/ml）	細菌（如G+、G-、支原體）	稀釋:1:100	-20oC
03-035-1B	硫酸慶大霉素溶液（50 mg/ml）	細菌（如G+、G-、支原體）	稀釋: 1:1000	AMB室溫
03-031-1B	青鏈雙抗（10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate）	細菌（如G+、G-）	稀釋: 1:100	-20oC
03-031-5B	青鏈雙抗，10濃縮液（10X Conc., 100,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 100mg/ml, Streptomycin Sulfate）	細菌（如G+、G-）	稀釋: 1:1000	-20oC
03-032-1B	青鏈霉素，制霉菌素三抗（10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 1,250 units/ml Nystatin）	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC
03-033-1B	青鏈霉素，兩性霉素B三抗（10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 25 ug/ml Amphotericin B）	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC
03-034-1B	青鏈霉素，新霉素三抗（10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 25mg/ml Neomycin Sulfate）	細菌（如G+、G-）	稀釋: 1:100	-20oC

真菌克星-抗生素

貨號	抗生素	作用對象	使用比例	儲存條件
03-029-1B	兩性霉素（2500ug/ml）	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000	-20oC
03-030-1C	制霉菌素（10,000units/ml）	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋:1:100 to 1:1000	-20oC
03-032-1B	青鏈霉素，制霉菌素三抗（10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 1,250 units/ml Nystatin）	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC
03-033-1B	青鏈霉素，兩性霉素B三抗（10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 25 ug/ml Amphotericin B）	細菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀釋: 1:100	-20oC

支原體檢測試劑

EZ-PCR支原體檢測試劑盒（貨號：20-700-20）。

支原體檢測試劑盒的特異性：

引物與美國國家生物技術中心(NCBI)數據庫進行比對，并檢測16S，rRNA靶區同源性。96種支原體具有相關序列同源性。

支原體殺除試劑

BIOMYC-1（貨號：03-036-1B）、BIOMYC-2（貨號：03-037-1B）、BIOMYC-3（貨號03-038-1B）

方案一：

BIOMYC-1（03-036-1B）和BIOMYC-2（03-037-1B）的使用方法：

1. 加 1ml的 BIOMYC-1 溶液至 100ml培養基中，保持受污染的細胞在混合液中培養 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1 溶液的少許的新培養基；
2. 4天后，加1ml BIOMYC-2 溶液至 100ml 的新培養基中，并維持培養 3 天；

3. 以上是一個處理循環階段，可繼續2-3次如上處理循環。

4. 在處理過程中，細胞需要做支原體污染檢測，以確認效果，從而適當減少實驗過程。

方案二：

BIOMYC-3（03-038-1B）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培養基中；

2. 持續培養14天，期間每2-3天更換一次含BIOMYC-3培養基;

3. 14天后，用不含BIOMYC-3的完全培養基繼續培養細胞14天后再做支原體檢測。

經濟考慮，用戶選擇一種方案即可；最佳方案是，客戶先用方案一處理一周期，再用方案二處理一周期。

友情提示：如果使用其中一種方案，不能根除支原體，說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內；36，37，38三者聯合可有效根除實驗室95%以上的支原體污染。

黑膠蟲殺除試劑

BIOMYC-1（03-036-1B）、BIOMYC-2（03-037-1B）、BIOMYC-3（03-038-1B）

三抗 03-033-1B（主要成分：青、鏈、兩性霉素。）

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