一、初始雜交瘤細胞篩選（融合后篩選）
- HAT培養基篩選法
- 原理：利用氨基蝶呤阻斷DNA全合成途徑，迫使細胞依賴次黃嘌呤和胸腺嘧啶（應急途徑）。骨髓瘤細胞因缺乏HGPRT或TK酶無法存活，僅雜交瘤細胞能增殖。
- 篩選目標：排除未融合的淋巴細胞和骨髓瘤細胞，保留B細胞-骨髓瘤雜交瘤細胞。
二、抗體分泌能力檢測
- 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
- 操作：將抗原包被于酶標板，加入待測細胞上清，通過底物顯色定量檢測抗體濃度。
- 特點：特異性強，適用于高通量篩選，可結合雙抗體夾心法提升靈敏度。
- 免疫熒光（IF）/免疫細胞化學（ICC）
- 原理：利用熒光標記二抗檢測抗體與固定細胞/組織中抗原的結合，通過熒光定位判斷抗體特異性。
- 流式細胞術（FACS）
- 應用：檢測細胞表面抗原與抗體的結合，結合熒光標記實現單細胞水平篩選。
三、單克隆化純培養
- 有限稀釋法
- 將細胞梯度稀釋至每孔0.5-1個細胞，通過多次亞克隆確保單克隆性。
- 半固體培養基篩選
- 在含甲基纖維素的培養基中形成離散克隆，機械挑取單克隆細胞群。
- 流式分選技術
- 通過熒光標記抗體或分泌抗體捕獲技術（如細胞膜抗原結合法）分選目標克隆，效率較傳統方法提升10倍以上。
四、高親和力抗體篩選（進階）
- 抗原濃度梯度法
- 通過不同濃度抗原與抗體反應的信噪比評估親和力，信噪比越高提示親和力越強。
- 表面等離子共振技術（SPR）
- 實時監測抗體-抗原結合動力學參數（如Kd值），量化篩選高親和力抗體。
方法選擇依據
| 篩選目標 | 推薦方法 | 優勢 |
|---|---|---|
| 初始雜交瘤篩選 | HAT培養基 | 特異性排除非目標細胞 |
| 抗體分泌檢測 | ELISA/流式細胞術 | 高通量、定量分析 |
| 單克隆純化 | 有限稀釋法+流式分選 | 兼顧成本與效率 |
| 親和力優化 | 抗原濃度梯度法+SPR | 精準評估結合特性 |
注：實際應用中常組合多種技術，如HAT篩選聯合ELISA檢測，流式分選輔助單克隆化，以實現高效、精準的抗體篩選