石蠟切片免疫組化染色常見問題！
內源性生物素：生物素是一種維生素，作為一種輔酶參與羧化反應。在人體組織中，絕大多數生物素與線粒體丙酮酸鹽羧化酶相關，因此，富含線粒體的細胞具有豐富的內源性生物素，如腎臟、肝臟以及一些腫瘤細胞。如果應用生物素/卵白素檢測系統，由于卵白素可以和生物素不可逆地強結合，勢必會造成非特異性染色，熱介導的抗原修復可以顯著“復活”內源性生物素，所以更加加劇這種非特異背景染色。遠慕生物指出 ：解決的方法除了換成非生物素的檢測系統外，還可以用以下簡單的方法封閉內源性生物素。
首先用蛋清中的卵白素（一個雞蛋清加入到100ml的PBS中）封閉內源性生物素，再用5%奶粉作為生物素替代品（5克奶粉加入100ml的PBS/TBS中）來封閉卵白素中未結合的位點，沖洗后即可加一抗。內源性過氧化物酶天酒地一般紅細胞和嗜中性粒細胞中過氧化物酶含量比較高，會造成非特異性染色。
滅活內源性過氧化物酶的方法：0.3%-3%H2O2，用PBS（pH7.4）或蒸餾水或甲醇配制。沖洗步驟免疫組化染色步驟中包括多次沖洗過程，任何一步出現沖洗不干凈的問題，都有可能產生背景染色。解決的方法可以在沖洗液中加入吐溫20，一般在1000ml的沖洗液中加入0.2ml的吐溫20即可。鼠單抗用于鼠組織由于小鼠組織中可能含有內源性IgG，所以檢測系統就會識別這些抗體，造成非特異性染色。
解決的方法要么封閉內源性IgG，要么直接使用商品化的Mouse-to-Mouse檢測試劑盒。固定不及時 可以造成蛋白彌散，會產生異位染色。干片孵育的過程中沒有放入濕盒或加入液體過少或孵育時間過長，都會造成局部（尤其是邊緣）干片，應該避免。修復過度抗原熱修復（尤其是使用EDTA）有時會造成細胞核異位染色，對于細胞核染色的抗體這種情況應通過對照片加以甄別