金源康生物技術干貨 | 293T細胞培養攻略-技術前沿-資訊-生物在線

金源康生物技術干貨 | 293T細胞培養攻略

作者:內蒙古金源康生物工程股份有限公司 暫無發布時間 (訪問量:29671)

293T細胞最初稱為293tsA1609neo,是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。

一、細胞基本信息

【細胞名稱】人胚腎細胞

【細胞別名】Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T; 293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo

【種屬來源】人

【組織來源】腎

【細胞形態】上皮細胞樣

【生長特性】貼壁生長

【培養體系】MEM+10%FBS+1%P/S

【傳代比例】1:2~1:4,每 2-3 天換液一次

【培養條件】氣相:95%空氣+5%二氧化碳,溫度:37℃

【凍存條件】凍存液:60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO;存儲條件:液氮

【安全性】建議在二級生物安全臺內操作,并做好個人防護。

二、復蘇及傳代方法

/ 金源康生物 /

 1、細胞株的復蘇(凍存管)

1.將凍存管在37℃水浴鍋中迅速完全融化,并適當輕輕搖晃促融。快速、完全融化可以提高細胞的復蘇效果。

2.打開凍存管前時用75%酒精擦拭細胞凍存管外壁。

3.將完全融化的細胞直接離心,或者轉移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中,400g離心5min,吸除上清,注意不要吸走細胞沉淀,然后用新鮮完全培養液重懸后轉移至培養器皿,混勻,置于CO2培養箱37℃培養。

4.第二天視貼壁或生長狀態,更換培養液。

注意:如果收到的凍存管不能及時進行復蘇,還請置于-80℃或液氮中進行暫存,并盡快復蘇進行培養。

/ 金源康生物 /

 2、細胞株的復蘇(T25瓶)

1.將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

2.置于倒置顯微鏡下觀察細胞狀態,看是否有異常;無異常后,采用移液器移去多余的培養液,置于CO2培養箱37℃培養過夜。

3.第二天視貼壁或生長狀態,考慮進行換液或傳代,傳代比例參考1:2~1:4。

三、注意事項

1、每支凍存管約含1×106個細胞,體積為1ml,預期存活率60-90%,建議復蘇至1個T25瓶或1個6cm培養皿中。如果復蘇后存活率較低,可以消化后轉移至3.5cm培養皿/T12.5瓶中,這樣細胞生長會更好。

2、如果本產品是常溫運輸,并且是培養瓶中充滿完全培養液的貼壁細胞,收到細胞后:

(1)及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現象。

(2)用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2~4小時,以便穩定細胞狀態。

(3)仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息。

(4)靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態。

3、如果細胞密度超過85%請盡快進行傳代操作;如果懸浮的細胞較多,請將培養瓶置于培養箱中靜置過夜以使懸浮的細胞再次貼壁。如果收到的是常溫運輸的離心管裝的懸浮細胞,可以直接取出轉移至培養皿或培養瓶中培養。若培養液顏色正常則保留培養液繼續培養,并且在首次更換培養液時,保留一半原培養液,并加入一半新鮮培養液,這樣可以盡量避免由于培養液或血清差異導致細胞生長的不適應,確保細胞良好的生長狀態。

4、細胞培養請在生物安全柜臺中進行操作,并嚴格遵守無菌操作。

內蒙古金源康生物工程股份有限公司 商家主頁

地 址: 內蒙古呼和浩特市裕隆工業園B區4號

聯系人: 金源康生物

電 話: 400-880-5811

傳 真:

Email:bio@nmjyk.com

相關咨詢
ADVERTISEMENT