?核酸提取試劑盒(磁珠法)(Ex-DNA全血DNAⅡ代)
【產品名稱】 通用名稱:核酸提取試劑盒(磁珠法)(Ex-DNA全血DNAⅡ代)
【規 格】 50次/盒
【預期用途】 可從全血樣品中快速提取基因組DNA,實現平行樣本的高通量處理。
提取的核酸純度高,量大,可廣泛應用于基因組學研究、疾病檢測及法醫鑒定等
領域。
【檢測原理】核酸提取過程中,利用磁珠吸附原理,通過特制的磁棒吸附、轉移
和釋放磁珠,實現磁珠/核酸的轉移,自動完成核酸的提取和純化。
【試劑盒組成】
1 Magnetic Beads 1.5ml 6 Wash Buffer Ⅱ 6ml
2 Proteinase K 1支(干粉) 7 Wash Buffer Ⅲ 6ml
3 Proteinase K Buffer 1支 8 Wash Buffer Ⅳ 30ml
4 Lysis Buffer 25ml 9 Elution Buffer 5ml
5 Wash Buffer Ⅰ 18ml 10 β-巰基乙醇 0.3ml
【儲存條件及有效期】4℃保存。有效期一年。
【適用儀器】 TIANLONG NP968磁珠核酸提取儀及同類儀器
【樣本要求】
1. 適用樣本類型:全血等; 4℃保存不超過24小時,長期保存需置于-20℃。
【試劑配制】
1. Lysis buffer配制:按Lysis buffer:異丙醇=10:1加入異丙醇(需自
備),再按總體積的1%加入β-巰基乙醇,現配現用。
2. Wash Buffer I配制:Wash Buffer I加入12ml無水乙醇(需自備)充分混勻,即可使用。
3. Wash Buffer II配制:Wash Buffer II加入24ml無水乙醇(需自備)充分混勻,即可使用。
4. Wash BufferⅢ配制:Wash Buffer Ⅲ加入24ml無水乙醇(需自備)充分混勻,即可使用。
5. Proteinase K配制: 每支Proteinase K干粉中加入550 μl Proteinase K Buffer,使其
完全溶解,即可使用。溶解后的溶液于-20℃保存,反復凍融不得超過6次。
【使用方法】
1.手工提取步驟:
1.1 在1.5ml離心管中加入30μl Magnetic Beads 、10μl Proteinase K、500μl Lysis Buffer
(也可將Proteinase K、Lysis Buffer預混,分裝使用,現用現配)及200μl 樣品,55℃水
浴20分鐘。
1.2 將離心管置于磁力架上1分鐘,使管內磁珠被吸附,移走管內液體,取下離心管。
1.3 加入600μl Wash Buffer I,使磁珠重懸,利用磁力架吸附磁珠,1分鐘后移走管內液體,
取下離心管。
1.4 加入600μl Wash Buffer II,使磁珠重懸,利用磁力架吸附磁珠,1分鐘后移走管內液體,
取下離心管。
1.5 加入600μl Wash Buffer Ⅲ,使磁珠重懸,利用磁力架吸附磁珠,1分鐘后移走管內液體,
保持離心管在磁力架上。
1.6 加入600μl Wash Buffer Ⅳ,盡量不要吹散磁珠,1分鐘后移走管內液體,取下離心管。
1.7 加入50μl~100μl Elution Buffer,使磁珠重懸,55℃水浴5分鐘,期間輕輕晃動使DNA從
磁珠上洗脫下來。
1.8 將離心管置于磁力架上1分鐘,使磁珠被吸附,將液體轉移至新的1.5ml無核酸酶離心管
中,-20℃保存。
2. 自動化儀器提取步驟:
2.1 依下列表格,在96孔板中加入試劑:
1/7 標本混合液 10μl Proteinase K +500μl Lysis Buffer+200μl全血+30μl磁珠
2/8 Wash BufferⅠ 600μl
3/9 Wash BufferⅡ 600μl
4/10 Wash BufferⅢ 600μl
5/11 Wash BufferⅣ 600μl
6/12 Elution Buffer 100μl
2.2 按以下程序運行:
步驟 槽位 名稱 等待時間
(min) 混合時間
(min) 磁吸時間
(sec) 混合速度 體積(ul) 溫度狀態 溫度(℃)
1 1 裂解 0 20 90 快 750 裂解加溫 65
2 2 洗滌1 0 3 90 中 600 關閉 0
3 3 洗滌2 0 3 90 中 600 洗脫加溫 65
4 4 洗滌3 0 2 90 中 600 洗脫加溫 65
5 5 洗滌4 0 0 30 中 600 洗脫加溫 65
6 6 洗脫 0 5 90 中 100 洗脫加溫 65
7 2 棄磁珠 0 1 0 中 600 關閉 0
2.3自動化程序結束后,將第6及第12排的洗脫液轉移至干凈無核酸酶的離心管中,-20℃保存。
注:若Buffer 中有沉淀,請37℃水浴溶解后使用。操作時,若管壁和管蓋有液體,請短暫離心后
再置于磁力架上。
【注意事項】請務必在使用該試劑盒之前閱讀此注意事項。
1. 本試劑盒提取靶標為基因組DNA,
