mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix說(shuō)明書(shū)-分析方法-資訊-生物在線

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mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix說(shuō)明書(shū)

作者：上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (訪問(wèn)量:4227)

?mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格 價(jià)格(元) 說(shuō)明書(shū)
XY9206A 熱啟動(dòng)mTTx DNA/RNA 聚合酶 (5U/ul) 250U 1,750
XY9261A mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix 1 ml 750
XY9261B 25 ml 10,000
XY92262 RNA TaqMan熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒開(kāi)發(fā)服務(wù) 套 詢價(jià) ?
TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶，而逆轉(zhuǎn)錄活性較Tth DNA聚合酶大幅提高，在優(yōu)化的反應(yīng)Buffer中，TTx表現(xiàn)出卓越的RT-PCR特性，但TTx DNA Polymerase的活性仍然依賴(lài)于對(duì)PCR有抑制活性的Mn2+，這種專(zhuān)用的反應(yīng)Buffer系統(tǒng)限制了TTx應(yīng)用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶經(jīng)電子重構(gòu)架技術(shù)，改變了TTx的活性配體中心，使其在Mg2+條件下仍然具有極強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)錄活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+條件下對(duì)于DNA模板和RNA模板擴(kuò)增能力幾乎無(wú)偏差，這種獨(dú)有的特性使得mTTx不再受限于反應(yīng)Buffer系統(tǒng)，增加了其應(yīng)用的拓展性，使得多種類(lèi)型的實(shí)驗(yàn)得以實(shí)現(xiàn)，包括：采用單酶進(jìn)行TaqMan RT-PCR、在單管相同的Buffer系統(tǒng)中對(duì)RNA和DNA進(jìn)行多重檢測(cè)、超多重的RNA模板擴(kuò)增、RNA的NGS建庫(kù)、高保真RT-PCR擴(kuò)增等。

主要特征
  • 依賴(lài)于DNA模板的聚合酶活性；
  • 5'-3'外切酶活性，用于TaqMan探針切割；
  • 金屬配體離子為Mg2+，通常使用濃度2-3.5mM；
  • 可以有效的使用dUTP，建立防污染體系；
  • 相比于TTx DNA聚合酶，mTTx的耐熱性能有所下降，92℃條件下的半衰期為30min；
  • 熱啟動(dòng)版本的mTTx在50℃條件下100%無(wú)活性，92℃加熱5min后恢復(fù)活性。

單位定義
一個(gè)活力單位即在在68°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲(chǔ)存
-20℃可保存3年，避免反復(fù)凍融。

使用方法（以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix為例）
1. 按以下組分配制RT-qPCR反應(yīng)液
2×mTTx MasterMix? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?10 μl
上游引物（10 μM）?????????????? ?????????????? ?????????????? 0.4 μl
下游引物（10 μM）?????????????? ?????????????? ?????????????? 0.4 μl
熒光探針（10 μM）?????????????? ?????????????? ?????????????? 0.2 μl
RNA? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? X μl
ddH2O? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? Up to 20 μl
注意：引物和探針的使用濃度可在0.1-0.8ul直接調(diào)整。
2. Direct One-Step RT-PCR程序
92℃? ? ? 5 min (熱啟動(dòng))
60℃? ? ? 5 min (逆轉(zhuǎn)錄)
92℃? ? ?10 s?
60℃? ? ? 30 s（收集信號(hào)） ?循環(huán)35-45次
注意：mTTx的最佳變性溫度為92℃，其它溫度條件都會(huì)導(dǎo)致試劑性能下降。逆轉(zhuǎn)錄步驟的溫度可根據(jù)實(shí)際情況在58-70℃調(diào)整。

實(shí)例展示
1. 以2019新冠病毒N基因體外轉(zhuǎn)錄RNA直接作為模板，應(yīng)用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix對(duì)不同拷貝的目標(biāo)RNA進(jìn)行TaqMan qPCR擴(kuò)增，結(jié)果表明不同拷貝數(shù)的RNA，擴(kuò)增性能良好。
直接一步法RT-qPCR
2. 應(yīng)用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix對(duì)不同拷貝的目標(biāo)DNA和RNA進(jìn)行TaqMan qPCR擴(kuò)增，結(jié)果表明該產(chǎn)品對(duì)DNA模板和RNA模板擴(kuò)增幾乎無(wú)偏差，RNA模板比DNA模板更容易檢出。
直接一步法RT-qPCR
3.將不同數(shù)量的Jurkat細(xì)胞直接加入到TaqMan PCR反應(yīng)體系中，應(yīng)用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix進(jìn)行內(nèi)參基因GAPDH的TaqMan qPCR擴(kuò)增。
直接一步法RT-qPCR
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