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ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置？最近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：
1、ELISA實驗包被緩沖液
2、ELISA實驗洗滌緩沖液
3、ELISA實驗稀釋液
4、ELISA實驗終止液
5、ELISA底物緩沖液
6、ELISA實驗TMB四甲基聯苯胺、使用液
7、ELISA實驗ABTS使用液
8、ELISC
1、ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液)：
| NaHCO3 | 1.59g |
| NaHCO3 | 2.93g |
| 加蒸餾水至1000ml |
2、ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
| KH2PO4? | 0.2g |
| Na2HPO4·12H2O | 2.9g |
| NaCl? | 8g |
| KCl | 0.2g |
| Tween-20 0.05% | 0.5ml |
|
加蒸餾水至1000ml |
3、ELISA實驗稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗滌緩沖液至100ml或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
4、ELISA實驗終止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸98%、21.7ml。
5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)：
0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2g/L) ? ? ? ??24.3ml
加蒸餾水50ml
6、ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液：
TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) ? ? ? ? ? ??10ml
0.75%H2O2 ? ? ? ?32μl
7、ELISA實驗ABTS使用液：
ABTS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) ?? 1ml
3%H2O2 2μl
8、ELISA實驗封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) ? ? ? ? ? ? ? ?5g
加洗滌緩沖液至 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?100ml
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。
為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。