犬白三烯C4（LTC4）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用? ?????目的：本試劑盒用于測定犬血清，血漿及相關液體樣本中白三烯C4（LTC4）含量。
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實驗原理：
??? 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中犬白三烯C4（LTC4）水平。用純化的犬白三烯C4（LTC4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白三烯C4（LTC4），再與HRP標記的白三烯C4（LTC4）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白三烯C4（LTC4）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中犬白三烯C4（LTC4）濃度。
試劑盒組成：
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試劑盒組成 |
????? 48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1個 |
1個 |
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酶標包被板 |
1×48 |
1×96 |
2 |
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標準品：270ng/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
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標準品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2 |
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酶標試劑 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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樣品稀釋液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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顯色劑A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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顯色劑B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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終止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2 |
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20倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
30ml×1瓶 |
2 |
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/SPAN>2
操作步驟
1.???????? 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品