一般每個抗體可以標記3～5個生物素，標記時，生物素與抗體的比率受抗體濃度影響，對于10 mg/ml 的抗體溶液來說，生物素應超過蛋白12倍（摩爾數），對于2 mg/ml 的抗體溶液應超過20倍，生物素也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。
蛋白樣品不得含有疊氮鈉、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物。
1. 抗體/蛋白的前處理：
1.1 選擇適當截留的超濾柱中加入400μl 標記反應溶液（0.1M PBS pH 7.2），加入1mg抗體，混勻。
1.2 4℃，6,000rpm，離心2min，棄濾液；于超濾柱中再加入200μl 標記反應溶液，混勻。4℃，6,000rpm，離心2min，
1.3 重復步驟1.2 6～7次。
1.4 混勻超濾柱中的殘留的液體，室溫靜置1min；將超濾柱反轉倒置于一新的超濾管中，4℃，6,000rpm，2min，收集液體。
1.5 取50μl PBS于超濾柱中混勻，靜置1min。倒置超濾柱，4℃，6,000rpm，2min，收集液體。
1.6 步驟1.4 與步驟1.5 的收集的濾液合并，用標記反應溶液調節抗體濃度到2mg/ml，4℃放置備用。
2. 生物素的標記：
2.1 將生物素溶解在合適的溶劑中（請參照所選購生物素的說明書，不同的生物素其溶劑不同），濃度為20mg/ml,按照生物素與抗體分子摩爾比1:20的比例加入抗體溶液，室溫反應1h。
2.2 葡聚糖凝膠分離純化/透析袋或者超濾管去除游離生物素及其他試劑。
2.3 將抗體保存于合適的抗體保存液。
?進行抗體標記的時候，需要對抗體性質、交聯劑和標記物的性質非常了解，否則很難標記出高品質的抗體；標記量低，導致信號值低；標記量太高，不但容易造成背景，并且還容易由于標記物的聚集造成信號拮抗，反而降低或者淬滅信號值。標記物的種類繁多，不同類型的標記物其性質完全不一樣，標記物很難選擇和把握，建議初學者使用專業化的試劑盒進行標記，或者直接委托專業化公司標記。福因德生物提供以下抗體標記相關產品，同時可以提供抗體/蛋白標記服務。