本實驗主要參考 GB 5413.36-2010 《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測定》，建立的方法簡單快捷，可以滿足奶粉中脂肪酸和反式脂肪酸的日常檢測，為奶粉中脂肪酸的營養安全研究工作提供支持，同時對其他樣品中脂肪酸和TFAs的同時檢測提供參考。

樣品前處理

1) 稱取5.0g嬰配奶粉樣品，在乙醇2mL、水4mL和氨水20mL的介質中，于80℃的恒溫水浴中振蕩水解40min，每間隔5min振蕩一次.

2) 水解完成后冷卻至室溫，并在水解混合物中加入乙醇10mL混勻。用體積比為1：1的乙醚-石油醚混合液30mL振蕩提取10min，離心5min，收集醚層提取液，留存于燒瓶中。

3) 再用乙醚-石油醚按相同步驟重復提取2次。所收集的醚層提取液合并旋轉蒸發至干，所得殘留物即為從樣品提取所得脂肪總量。

4) 取此提取所得脂肪60.0mg，溶解于異辛烷4mL中，再加入2mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液200μL，振蕩1min，靜置至澄清，使脂肪酸甲酯化。

5) 加入硫酸氫鈉1g中和氫氧化鉀，離心5min。取上層溶液按儀器工作條件進行分析測定。

色譜條件

色譜柱：SP-2560 毛細管柱 100m×0.25mm×0.2μm (貨號: 24056)

進樣口：250℃

檢測器（FID）：260℃

柱溫箱：初始溫度為：140℃，保持3min；然后以4℃/min的速率升溫至180℃，保持5min;再以 1℃/min的速率升溫至200℃，保持5min；最后以4℃/min的速率升溫至240℃保持10min。

分流比：25：1

流速： 1.0mL/min

標準品： Supelco 37種脂肪酸甲酯混標（貨號: CRM47885）

實驗譜圖

圖譜一：37種脂肪酸甲酯標準溶液色譜圖

1 - 丁酸甲酯；2 - 己酸甲酯；3 - 辛酸甲酯；4 - 癸酸甲酯；5 - 十一碳酸甲酯；6 - 月桂酸甲酯；7 - 十三碳酸甲酯； 8 - 豆蔻酸甲酯；

9 - 順-９-十四碳烯酸甲酯；10 - 十五碳酸甲酯；11 - 順-10-十五碳烯酸甲酯；12 - 棕櫚酸甲酯；13 - 順-9-十六碳烯酸甲酯；

14 - 十七碳酸甲酯；15 - 順-10-十七碳烯酸甲酯；16 - 硬脂酸甲酯；17 - 反-9-十八碳烯酸甲酯；18 - 油酸甲酯；

19 - 反，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯；20 - 順，順-９,12-十八碳二烯酸甲酯；21 - 花生酸甲酯；22 - 順，順，順－６,９,12 -十八碳三烯酸甲酯；23－順-11-二十碳烯酸甲酯；24－ 順，順，順－９,12-15-十八碳三烯酸甲酯；25 - 二十一烷酸甲酯；26 - 二十碳二烯酸甲酯；

27 - 山崳酸甲酯；28 - 順－８,11,14－二十碳三烯酸甲酯； 29 - 順-13-二十二碳一烯酸甲酯；

30 – 順-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯 31 - 花生四烯酸甲酯；32 - 二十三烷酸甲酯；33 - 二十二碳二烯酸甲酯；34 - 二十四烷酸甲酯；

35 - 二十碳五烯酸甲酯；36 - 二十四碳烯酸甲酯；37 - 二十二碳六烯酸甲酯

圖譜二：15 種反式脂肪酸標準溶液色譜圖

1- 反-9-十六碳烯酸甲酯；2- 反-6-十八碳烯酸甲酯； 3- 反-9-十八碳烯酸甲酯；4- 反-11-十八碳烯酸甲酯；5- 反亞油酸甲酯；

6- 反-10-順-12-十八碳二烯酸甲酯；7- 反-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯；8- 反-9,12–順-15-十八碳三烯酸甲酯

9- 反-9-順-12-反-15-十八碳三烯酸甲酯；10- 順–9–反–12, 15-十八碳三烯酸甲酯；11- 順-9-反-12-順-15-十八碳三烯酸甲酯；

12-反-9-順-9-反-12-順-15-十八碳三烯酸甲酯；13- 反-9-順-12,15-十八碳三烯酸甲酯；14– 反-11-二十碳烯酸甲酯；

15- 反-13-二十二碳烯酸甲酯

圖譜三 ：奶粉基質空白色譜圖

圖譜四：奶粉加標樣品色譜圖

1-反-9-十六碳烯酸甲酯；(2+3+4) - (反-6-十八碳烯酸甲酯 + 反-9-十八碳烯酸甲酯 + 反-11-十八碳烯酸甲酯)

5- 反亞油酸甲酯；8- 反-9,12–順-15-十八碳三烯酸甲酯；9- 反-9-順-12-反-15-十八碳三烯酸甲酯； 10- 順–9–反–12, 15-十八碳三烯酸甲酯

(11+12) – (順-9,12-反-15-十八碳三烯酸甲酯 + 反-9-順-12-反-15-十八碳三烯酸甲酯 )

(7+13+14)- 反-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯 + 反-9-順-12,15-十八碳三烯酸甲酯 + 反-11-二十碳烯酸甲酯

6- 反-10-順-12-十八碳二烯酸甲酯；15- 反-13-二十二碳烯酸甲酯

總結

如圖，所測定的15種反式脂肪酸甲酯分別在一定的質量濃度內與相應的峰面積之間呈線性關系，其檢出限(3S/N) 為 0.42~1.45mg/L。按標準加入法測得的回收率75.5％～107％，測定值的相對標準偏差（n=5）在1.1％～8.5％之間。脂肪酸采用面積歸一化法測定，按此方法分析了嬰兒奶粉，其中飽和脂肪酸含量在５０％以上，反式脂肪酸含量均小于0.5％，均符合國家標準規定。