昆蟲細胞培養起始于1915年,距今已超過百年的時間,廣泛應用于細胞生物學、分子生物學、昆蟲學、病毒學、醫學等研究領域。昆蟲細胞培養基也經歷了天然培養基、合成培養基和無血清培養基三個階段,尤其是無血清培養基含有細胞所需營養物質,添加無動物源的細胞生長因子,在保證細胞生長良好的基礎上,是昆蟲細胞用于更多的研究領域。
現在,研究和應用較多的昆蟲細胞系主要為草地貪葉蛾卵巢細胞系Sf21及其克隆株Sf9,和粉紋夜蛾胚胎細胞系High Five。昆蟲細胞系對模式病毒苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)敏感,構建成實驗室常用的昆蟲桿狀病毒細胞表達平臺。昆蟲桿狀病毒表達平臺具有重組蛋白表達量高、蛋白翻譯后修飾全面、適合大規模生產等優勢,已廣泛用于藥物研發、疫苗開發等領域。
義翹神州經過多年細胞培養研發,開發出了SIM HF培養基。這是一款專門用于培養High Five細胞的無血清無蛋白添加的培養基。SIM HF培養基不含動物源組分、不含血清、不含抗生素,由基礎培養基和添加組分(促生長因子、酶抑制劑、結合蛋白、轉運蛋白、微量元素等)構成,可用于實驗研究、工業生產。
SIM HF無血清培養基屬于即用型完全培養基,適用于細胞增殖、蛋白表達,與市場上的類似產品相比,性能更優越,可以提供更高的細胞生長密度,更高的重組蛋白產量。SIM HF培養基已有上千例蛋白表達成功案例,Nature、Cell等頂級期刊都有文章發表。
SIM HF培養基在GMP級車間生產,嚴格控制細胞生長、無菌、無支原體等各項指標。培養基生產線能夠實現大量制備,保證培養基批次間性能穩定。無血清昆蟲細胞培養基價格低廉,只有進口產品的幾分之一,能大大節省研究成本,特別適合有長期、大量需求的客戶。
SIM HF培養基產品的基本參數:
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外觀 |
淡黃色澄清溶液 |
適用細胞株 |
BTI-TN-5B1-4 (High FiveTM) |
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滲透壓 |
340-400 mOsm/kg |
細胞接種密度 |
0.3-0.6×106 cells/mL |
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pH值 |
6.0–6.5 |
最大細胞密度 |
>6×106 cells/mL |
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無菌檢測 |
無菌 |
倍增時間 |
< 26 hrs |
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儲存 |
2-8℃,避光 |
細胞培養評價 |
優良 |
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推薦使用時間 |
見瓶簽 |
病毒感染復數(MOI) |
0.5-2.5 |
SIM HF培養基使用基本步驟
細胞培養、傳代
將細胞接種到搖瓶、大培養三角瓶或生物反應器中,細胞培養體積勿超過搖瓶體積的1/3;
培養條件為27±1 ℃,搖床轉速為150 rpm(不同搖床轉速可能有差異,如細胞生長不好,請摸索最佳轉速,剛復蘇的細胞建議使用較低轉速進行適應性培養);
當細胞密度生長達到2~3×106 cells/mL時,可以進行傳代。
用新鮮的培養基將細胞稀釋至合適密度( 0.3-0.6×106 cells/mL ),接種至合適的容器中。
細胞凍存
選擇處于對數生長期的細胞,保證活率大于90%;
制備細胞凍存液:45% 新鮮培養基,45% 條件培養基, 10% 二甲基亞砜溶液(DMSO) ;
200 g離心5 分鐘,棄去上清;
用細胞凍存液重懸細胞, 取樣計數,調整細胞密度;
迅速分裝細胞至無菌的凍存管中,每管1~2 mL,密封;
將凍存管放入程序降溫盒中,-70 ℃冰箱放置過夜; 如需要長期保存,在液氮罐中保存。
細胞復蘇
將凍存管迅速轉移至27℃水浴中,進行融化。
將融化的細胞轉至無菌的含5-10ml新鮮培養基的無菌離心管中。
200g低速離心5分鐘,緩慢倒掉上部培養基,不要將沉降的細胞懸起。
用15-20ml新鮮培養基重懸細胞,確保重懸后的細胞密度為0.6×106/ml左右。
將重懸的細胞放入無菌培養瓶中,旋蓋擰松,放在搖床中懸浮培養。
當細胞密度生長達到2~3×106/ml時,可以進行傳代,傳代密度為0.4-0.5×106/ml。
