??

如何選擇合適的DNA聚合酶？

聚合酶鏈式反應(PCR)是分子生物學研究的核心技術，每位生物科研工作者對其都不陌生。PCR技術的核心成份是DNA聚合酶，它是PCR反應成敗的一個關鍵因素。目前市場上的DNA聚合酶種類繁多，常見的有：Taq，Canace，Pfu，KOD，Phusion，Primerstar，Tth等，面對眾多選擇，對于不了解各種DNA聚合酶特性的科研菜鳥來說，都不知該如何下手。

在選擇之前，先了解一下DNA聚合酶的四個重要特點：熱穩定性，保真度，擴增速度及特異性。

l?? 熱穩定性

熱穩定性是指DNA聚合酶能夠耐受高溫的能力。不同的DNA聚合酶的熱穩定性差異較大，一般通過半衰期來體現。

l?? 保真度

保真度是指DNA聚合酶精確復制DNA模板的能力。部分DNA聚合酶具有3’-5’的核酸外切酶活性，能夠校正錯誤堿基。保真度的高低可通過錯配率來體現。

l?? 擴增速度

擴增速度是指在延伸時，DNA聚合酶向DNA新鏈中摻入核苷酸的速率。擴增速度除與DNA聚合酶有關，還會受到延伸溫度，緩沖液及模板復雜程度等的影響。

l?? 特異性

特異性是指DNA聚合酶在PCR過程中只擴增目的片段的能力。為了提高PCR特異性，常通過抗體法或配體法等方式對DNA聚合酶進行修飾，使酶活性在低溫條件下封閉，減少非特異性延伸和擴增。

接下來，小編介紹幾種常用的DNA聚合酶及其應用，您可根據實驗目的不同，選擇合適的DNA聚合酶。

1）Taq DNA聚合酶（應用：常規PCR。）

Taq DNA聚合酶來源于Thermus aquaticus，熱穩定性高，在PCR循環高溫條件下仍可保持較高的酶活。Taq DNA聚合酶具有良好的行進性，擴增效率高，擴增速度為30-60 sec/kb。但該酶無3’→5’核酸外切酶活性，即無校正功能，易產生錯配堿基。使用該酶擴增得到的PCR產物3’末端帶A，可直接用于TA克隆。

2）高保真DNA聚合酶（應用：高保真PCR，如基因克隆、點突變、測序及SNP分析等。）

高保真DNA聚合酶是一類具有3’→5’核酸外切酶活性的酶，具有校正功能，擴增產物為平末端。當實驗對保真度要求較高時，需選擇此類酶。常見的高保真酶有Pfu、KOD、Phusion、Canace等。不同的高保真酶在保真度，擴增速度，擴增效率等方面有所差異。一代的高保真酶的保真度較低，擴增速度較慢，如Pfu，KOD等。

翊圣生物推出了Canace高保真DNA聚合酶。該酶是基于Pfu DNA聚合酶改造而成的新一代高保真DNA聚合酶。該酶的保真性，擴增速度，擴增長度等都有了很大提升。其保真性是Taq酶的52倍，Pfu酶的6倍，延伸速度可達15 sec/kb，可擴增20 kb的長片段，非常適合高保真PCR。Canace酶具有極高的性價比和廣泛的模板適應性，已經成為市場上熱門的新產品。

3）熱啟動DNA聚合酶（應用：低拷貝基因擴增。）

熱啟動DNA聚合酶是一類提高PCR產物特異性的酶。該類酶是通過抗體法或配體法等方式對DNA聚合酶進行修飾而成，使得DNA聚合酶活性在預變性溫度下才被激活。

翊圣生物根據對DNA聚合酶修飾方式的不同，將熱啟動酶分為兩類：一類是配體法修飾的熱啟動酶，如Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase，預變性95℃，2-3 min釋放酶活；另一類是抗體法修飾的熱啟動酶，如UNICON? Hot Start Taq DNA Polymerase，50℃，30 min條件下仍然可以完全封閉活性。預變性95℃，30 sec即可釋放酶活。使用該類酶擴增得到的PCR產物3’末端帶A，可直接用于TA克隆。

4）Taq Plus DNA聚合酶（?應用：快速、常規PCR。）

Taq?Plus DNA聚合酶是由Taq?DNA聚合酶和具有3’→5’核酸外切酶活性的高保真DNA聚合酶按比例混合而成，具有擴增效率高和錯配率低的優良性能，其擴增速度為30 sec/kb，錯配率是Taq DNA聚合酶的1/6。使用該酶擴增得到的PCR產物3’末端帶A，可直接用于TA克隆。

5）Long Taq DNA聚合酶（應用：長片段PCR。）

Long Taq DNA聚合酶也是Taq?酶與高保真酶按比例混合而成的酶，配上優化的緩沖體系可使得該酶可擴增長達8?kb的人基因組DNA片段和10?kb的質粒模板。其PCR產物3’末端帶A，可直接用于TA克隆。

6）直接擴增DNA聚合酶（應用：轉基因型鑒定，基因分型）

直接擴增DNA聚合酶是指可以直接以樣本裂解產物或未純化的基因組DNA為模板進行擴增的酶。該類酶具有很強的PCR反應抑制物耐受性。

翊圣生物針對不同樣本，通過對Taq DNA聚合酶改造，并配上優化的緩沖體系，開發出四款直接擴增DNA聚合酶。分別是用于動物組織的Animal Tissue Direct PCR Kit，特別針對小鼠組織的Mouse Tissue Direct PCR Kit，用于全血的Animal Blood Direct PCR Kit以及植物組織的Plant Tissue PCR Kit。這四款產品均可直接對樣本裂解液擴增，操作方便，減少了樣本用量、實驗成本和時間等。

產品選擇指南