百螢對最近收到的許多客戶關于轉染實驗遇到的問題進行了總結歸納，希望可以給其他準備/正在做相關實驗的同學一點小小的幫助。
1.哪種水平的DNA純度最適合轉染？
回答：
雖然DNA純度和濃度有一定范圍，但是包括所選的轉染試劑在內的幾個因素可能會影響特定的過程。
建議：
- 比較DNA /試劑濃度以獲得最佳性能。
- 在混合前檢測DNA和試劑的不同孵育時間。
- 將內毒素水平盡可能保持在最低。
- A260 / A280的最理想純度范圍為（1.7-1.9），首先嘗試在此范圍內進行調整。
2.如何使用流式細胞儀確定轉染效率？
回答：
使用流式細胞儀，確定特定轉染程序非常容易：
建議：
- 使用未轉染的細胞進行對照，并從實驗結果中減去基線強度數據。
- 信號強度圖是比較細胞系對不同轉染試劑反應最簡單有效的實驗輔助工具。
一般不需要太多手動分析，大多數儀器都具有自帶的FACS分析程序的軟件，可快速獲得結果。
3.轉染后我的細胞快要死了，我該怎么辦？
回答：
轉染后細胞死亡有許多可能的原因，我們建議您使用以下三種方法進行檢查：
- 在不使用試劑的情況下對DNA進行額外的監測：表達的蛋白質可能具有毒性。
- 檢查是否有污染并根據需要進行處理，或者使用新的培養液進行實驗。
- 選擇抗生素可能太強或添加太早。請以更低的濃度和更長的間隔再次嘗試實驗。