做細胞凋亡檢測，Annexin V是大家最熟悉的工具。最近試了百螢生物提供的 AAT Bioquest品牌Annexin V-XFD594（熒光結構與Alexa Fluor 594完全相同，性價比友好很多），整理了4個最容易翻車的細節，希望對你有用。
坑1：結合緩沖液里忘了加鈣
Annexin V結合磷脂酰絲氨酸（PS）必須依賴鈣離子。一定要用說明書配方的結合緩沖液（含2.5 mM CaCl?），千萬別用普通PBS代替，也別加EDTA，否則結果全白做。
坑2：貼壁細胞直接上流式
胰酶消化會損傷細胞膜，導致假陽性。貼壁細胞建議直接在蓋玻片上培養、染色，用熒光顯微鏡觀察。懸浮細胞（如Jurkat）沒有這個問題，直接離心收集即可。
坑3：只染Annexin V，不染PI
晚期凋亡和壞死細胞同樣暴露PS。不加死細胞染料，你分不清早期凋亡（Annexin V?/PI?）和晚期凋亡/壞死（Annexin V?/PI?）。強烈建議搭配PI或7-AAD。
坑4：反復凍融
每凍融一次，信號就會衰減一些。第一次解凍后分裝成小管（每管2-5μL夠一次實驗），用一管取一管，避免整管反復凍融。
把這四個坑避開了，數據會很漂亮。