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一、Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

動(dòng)物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對不同動(dòng)物組織進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒，適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強(qiáng)、操作簡易。

本試劑盒采用獨(dú)特的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種動(dòng)物組織樣品并釋放出基因組DNA，如昆蟲足翅、鼠尾、鼠趾、動(dòng)物皮膚和內(nèi)臟等。裂解產(chǎn)物可以用于DNA提取純化、也可以直接用于PCR反應(yīng)、也可以在-20℃或以下溫度條件下長期保存?zhèn)溆谩?/span>

本試劑盒中提供的2×?Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很強(qiáng)的擴(kuò)增兼容性，不需要額外采用純化提取試劑去除裂解產(chǎn)物中的各種殘骸雜質(zhì)，能直接以待測樣品裂解液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑為2倍濃縮PCR反應(yīng)混合液，包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，大大簡化擴(kuò)增步驟的操作過程，降低污染幾率。

該試劑盒可用于動(dòng)物基因擴(kuò)增檢測、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物基因型鑒定等。

產(chǎn)品組分

? a）Lysis Buffer 和Proteases兩種組分配合使用于動(dòng)物組織裂解；??

b）2× Tissue?Direct PCR Mix (With Dye)?包含PCR擴(kuò)增所需要的熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg²⁺等；已混有溴酚藍(lán)染料作為電泳指示劑，?PCR產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳。

運(yùn)輸方法：冰袋運(yùn)輸。

保存方法

1. 試劑10184-A【Lysis Buffer】為動(dòng)物組織裂解緩沖液，在常溫下，可保存12個(gè)月。

2. 試劑10184-B【Proteases】為動(dòng)物組織裂解劑，使用時(shí)請勿長久開蓋，建議保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

3. 試劑10184-C【2×?Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建議保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

操作方法

樣品基因組DNA釋放

1. 在離心管中加入200 μL?Lysis Buffer，2 μL?Proteases，輕輕渦旋混勻；

2. 取約10 mg動(dòng)物組織，置于上述離心管中，輕輕渦旋混勻。

3. 55℃孵育5-30 min，然后95℃處理10 min。

4. 12000 rpm離心5 min。

5. 將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管，4℃或-20℃保存或直接用于PCR擴(kuò)增。

【注】：a）Lysis Buffer與Proteases混合后盡快使用，不宜長期保存；大量樣本操作時(shí)，可以將Lysis Buffer與Proteases按100?μL:1?μL的比例混勻備用。

b）組織應(yīng)取少量并盡量剪碎，以便裂解反應(yīng)更順利進(jìn)行；鼠尾組織可以取1-5 mm；皮膚內(nèi)臟等可以取約一粒米大小碎塊。

c）55℃孵育，一般5 min即可滿足多數(shù)PCR需求，如鼠尾、鼠耳等組織；若需要的DNA量較大或樣品較難裂解，可將時(shí)間延長至30 min或更久；組織塊不需完全裂解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)體系

【注】：各組分使用前應(yīng)充分混勻。

a）模板使用量：建議1-10%總體系。避免超過總體系的20%。

b）引物終濃度：推薦使用0.2-0.25 μM。反應(yīng)性能較差時(shí)，可在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

c）反應(yīng)體系：推薦使用20 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

d）體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。

e）對照反應(yīng)：建議進(jìn)行PCR時(shí)，設(shè)置陽性和陰性PCR對照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件