酵母雙雜系統(tǒng)-蛋白互作研究的好幫手
酵母雙雜交系統(tǒng)在1989年由Fields和Song研究并開發(fā)，是目前探究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的所有實驗系統(tǒng)中簡單靈活且高效率的方法之一。可應(yīng)用于互作蛋白的篩選、蛋白相互作用的鑒定/驗證，藥物作用位點篩選和藥物對蛋白互作影響研究等方面。
酵母雙雜交系統(tǒng)優(yōu)勢
簡單高效：構(gòu)建表達載體即可實現(xiàn)蛋白互作研究，省去蛋白表達、純化等步驟；
高敏感性：可滿足相對較弱的蛋白互作以及瞬時發(fā)生的蛋白互作檢測；
真實性優(yōu)：一定程度上保留蛋白質(zhì)的折疊與空間構(gòu)像，最大限度接近真實生理形態(tài)；
應(yīng)用廣泛：可對不同組織、器官、細胞、分化階段材料進行文庫構(gòu)建和篩選；
酵母雙雜交原理
圖片來源：維基百科
完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4從結(jié)構(gòu)上以及功能上可以劃分成相對獨立的兩個結(jié)構(gòu)域: DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（BD）和DNA轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）。其中BD可以識別并結(jié)合GALA的上游激活序列UAS，而AD與BD相互靠近并結(jié)合會招募轉(zhuǎn)錄因子，從而促進下游轉(zhuǎn)錄機制的進行。在酵母雙雜交系統(tǒng)中， 表達“誘餌”（bait）蛋白的cDNA構(gòu)建到含BD的載體中，表達BD-bait融合蛋白，表達“獵物”（prey）蛋白的cDNA構(gòu)建至含AD載體中，表達AD-prey融合蛋白。如果bait與prey蛋白之間有相互作用并能形成蛋白-蛋白復(fù)合物，可使AD和BD彼此靠近，從而激活下游轉(zhuǎn)錄機制的進行。通過檢測報告基因表達與否，可以獲取蛋白質(zhì)間相互作用的有效信息。
常見的報告基因表達檢測方式
圖片來源：Paiano A et al. Curr Protoc Protein Sci. 2019
功能互補：報告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1的激活，使得酵母可在營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基（缺乏Leu/Trp/His/Ade）上生長。
顯色反應(yīng)：報告基因表達α-半乳糖苷酶，使X-α-Gal顯色底物變藍。有時還可選擇金擔(dān)子素A作為進一步檢測的報告因子。
通常選擇功能互補和顯色反應(yīng)相結(jié)合的方式確保篩選到陽性菌落。
酵母雙雜系統(tǒng)的應(yīng)用
1. 發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)的新功能
2. 在細胞體內(nèi)研究抗原和抗體的相互作用
3. 篩選藥物的作用位點
4. 建立基因組蛋白連鎖圖。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
|
產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
|
RNA提取 |
TRIeasyTM LS Total RNA Extraction Reagent 液體總RNA提取試劑（同TRIzol LS） |
19201ES |
|
MolPure? TRIeasy Plus Total RNA Kit 總RNA提取試劑盒(帶離心柱） |
19211ES |
|
|
MolPure? Cell/Tissue Total RNA Kit 細胞/組織總RNA提取試劑盒 |
19221ES |
|
|
MolPure? Plant RNA Kit 植物RNA提取試劑盒 |
19291ES |
|
|
MolPure? Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物RNA提取試劑盒 |
19292ES |
|
|
MolPure? Bacterial RNA Kit 細菌RNA提取試劑盒 |
19301ES |
|
|
MolPure? Viral DNA/RNA Kit 病毒DNA/RNA提取試劑盒 |
19321ES |
|
|
篩選底物 |
X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 |
10903ES |
|
篩選抗生素 |
Aureobasidin A(AbA) 金擔(dān)子素A |
60231ES |