抗體親和純化系列
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——抗體純化，若有選擇，必是首選
產品概述
Protein A、Protein G是最常應用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。將Protein A、G分別固定在不同的介質上，或同時將Protein A、G共價偶聯到介質表面，是從腹水、細胞培養物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具。
Protein L源于細菌，能更廣泛地結合各種類型以及亞類的免疫球蛋白，包括所有類型的IgG和單鏈可變區(ScFv)以及Fab片段。該蛋白只與抗體的kappa鏈結合而不會影響抗體的抗原結合位點，這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比，能更廣泛地結合各種來源及亞類的抗體。
Yeasen生物提供一系列以蛋白A、蛋白G與蛋白L為核心的抗體純化工具，涵蓋不同類型填料樹脂及自動層析預裝柱，方便使用手動或自動化方式純化抗體蛋白質。
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Protein?A、G、L的差異分析
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Protein?A |
Protein?G |
Protein?A/G |
Protein?L |
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優點 |
高流量； 結合能力強； 與IgG的Fc和Fab和F（ab’）2片段結合 |
? 比Protein?A有結合范圍更廣泛 |
? 結合范圍更廣； 結合能力更強； 實用性更高 |
不僅可以結合所有的Ig類(IgG，IgM，IgA，IgE和IgD)； 還可以結合單個輕鏈（Scfv）和Fab片段 |
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缺點 |
宿主細胞蛋白的一些非特異性結合 |
不能像蛋白A一樣耐受苛刻的洗脫條件 |
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不結合牛、山羊或綿羊來源的免疫球蛋白 |
附表1是關于蛋白A和蛋白G對于不同的免疫球蛋白相對結合力的比較，可用于預測蛋白A或蛋白G作為親和介質時的選用指導。對于來自特別物種IgG的最佳結合條件，應該查閱近期的文獻，獲得最有價值的信息。
純化原理
親和純化是一種具有可逆反應的生化分離純化技術，如抗原與抗體。適用于從成分復雜且雜質含量遠大于目標物的混合物中提純目標物。如圖1所示，首先填料與介質偶聯，結合形成具有特異親和性的分離介質，再向柱子中注入樣本，配體選擇性的吸附目標物質，平衡液洗雜，最終用洗脫液將目標物質進行洗脫。
圖1?親和層析示意圖
產品性能
將蛋白樣本Protein?A和Protein?G純化IgG，IgG片段和亞類的基礎是二者對IgG-類型的多克隆抗體和單克隆抗體具有很高的特異性親和力。
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圖2?Protein?A、G親和性
純化指南
Yeasen生物抗體純化類工具，以基因改造后的Protein?A/G、Protein?L為原料，通過不同化學方法將其定向、高效的偶聯到瓊脂糖基質上，不僅降低了蛋白的非特異性結合、實現了樹脂較高的抗體載量，同時也獲得了適用于不同純化要求的抗體純化產品。
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產品系列 |
普通型純化樹脂系列 |
快速型純化樹脂系列 |
預裝柱系列 |
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Protein A、G 、A/G、L Agarose |
Protein A、G 、A/G、L 4FF Agarose |
Protein A、G、L 4FF Chromatography Column |
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平均粒徑d50V |
45-165μm |
90μm |
90μm |
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配基 |
重組蛋白 |
重組耐堿蛋白 |
重組耐堿蛋白 |
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載量 |
Protein?A?>?40mg人IgG/mL Protein G?>?30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/mL Protein L?>?15mg人IgG/mL |
Protein?A?>?40mg人IgG/mL Protein G?>?30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/Ml Protein L?>?15mg人IgG/mL |
Protein?A?>?40mg人IgG/mL Protein G?>?30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/mL Protein L?>?30mg人IgG/mL |
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最大操作壓力 |
0.1MPa,1bar |
0.3MPa,3bar |
0.3MPa,3bar |
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支撐物 |
4%瓊脂糖微球 |
高度交聯4%瓊脂糖微球 |
高度交聯4%瓊脂糖微球 |
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優勢 |
非特異性結合低，高載量 |
非特異性結合極低，高載量高流速，強穩定性 |
柱效穩定，高載量，高流速，強穩定性，標準接口適配商品化各類中壓色譜系統 |
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推薦應用 |
任意規模抗體純化 |
任意規?？贵w純化，IP |
小規模抗體純化 |
純化實例
使用Protein A 1mL預裝柱純化鼠單抗IgG1，純化效率高于95%。
圖3?Protein A純化結果示意圖
FAQ
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常見問題 |
原因分析 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過高 |
篩板堵塞 |
清洗或更換篩板 地 址： 上海市浦東新區天雄路166弄一號樓三層南單元 聯系人： 李自轉 電 話： 400-6111-883、021-34615995-8075 傳 真： 021-34615995-188 Email：lizizhuan@yeasen.com
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