我們都知道基因剪刀CRISPR/CAS9技術今年大火，之所以這個技術這么火和其對基因操作的方便性，高效性，準確性及高性價比是分不開的。CRISPR/Cas9是一種能夠對任何物種基因組的特定位點進行精確編輯的技術。其原理是核酸內切酶Cas9蛋白通過導向性RNA (guide RNA， gRNA) 識別特定基因組位點并對雙鏈DNA進行切割。一旦DNA鏈被切開后就能對特定基因引入敲除、敲入、突變等編輯。
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圖注：基于非同源末端修復和同源重組原理可進行基因敲除，敲入和突變等操作
然而基于傳統的sgRNA載體的CRISPR-CAS9技術，由于僅靶向一個位點，所以更適合單個編碼基因的敲除，對于多個編碼基因和非編碼基因則需要同時導入多個sgRNA載體/病毒，使操作難度上升不小。
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圖注：單sgRNA系統針對一個位點進行編輯
為解決多個編碼基因同時敲除和lncRNA敲除的需求，Multiplex sgRNA 技術應運而生
Multiplex sgRNA system可同時插入不同的sgRNA，幫助解決同時敲除多基因或非編碼基因編輯的需求?？梢酝瑫r插入2~5個sgRNA符合不同的實驗需求。
針對多個編碼基因其敲除策略可以為：
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圖注：同時設計兩個或多個編碼基因的特異性sgRNA序列，插入載體中可在一次操作后敲除多個編碼基因
而針對非編碼基因或區域其策略可以是：
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圖注：針對想要敲除的非編碼基因或區域兩頭設計特異性sgRNA序列，靶向切除整段非編碼區域，以達到非編碼基因敲除的目的
對于通路研究的同學來說，有時需要同時抑制多個通路，而通路抑制劑還是蠻貴的，如果有了可靠的通路關鍵基因的sgRNA序列，那就可以像通路抑制劑一樣使用CRISPR/CAS9技術來同時抑制多個信號通路了，大大提高了性價比。對于Car-T研究的同學來說，編輯T細胞制作UCAR-T的時候需要同時敲除多個檢查點基因使得CAR-T細胞標準化和可量產化，這時同時導入多個sgRNA就可以方便的滿足這一要求。
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