?產品信息

產品描述

試劑盒內含兩種熒光染料DMAO和EthD-III，可分別將活細菌和死細菌染上綠色和紅色。其中DMAO是一種綠色核酸熒光染料，可染色活細菌和死細菌。EthD-III是一種紅色核酸熒光染料，僅染色細胞膜受損的死細菌。將DMAO和EthD-III混合使用染色時具有完整細胞膜的細菌呈現綠色，而具有受損細胞膜的細菌呈現綠色和紅色。結果可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀來分析，適用于大多數細菌類型。

細菌活力的常見標準是細菌在合適的營養培養基中繁殖的能力，稱為生長測定。該試劑盒通常與在液體或固體培養基中的生長測定結果有著很好的一致性。在某些條件下，膜損傷的細菌可能會在營養培養基中恢復并繁殖，而這種細菌在該測定中可能會被認為死亡。相反，一些具有完整膜的細菌可能無法在營養培養基中繁殖，但這些細菌在該測定中可能被認為是活的。因此，如果發現該檢測和細菌生長測定之間有相當大的差異，應該考慮上述的可能性。

光譜特性DMAO：Ex/Em=503/530nm（withNDA）； EthD-III：Ex/Em=530/620nm（withNDA）

產品組分

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。儲存于 4oC，至少可以儲存6個月。

注意事項

操作時請采取防護措施，穿防護服、戴一次性手套等。

使用方法

活、死細菌樣品對照制備

1. 在液體培養基中培養4 mL的細菌至晚期對數期。

2. 在EP管中準備兩份1mL的細菌液，并在5,000-10,000g條件下離心10-15 min。

3. 去除上清液，在其中一支EP管中加入0.3mL的0.85% NaCl重懸細菌，在另一管中加入1 mL的0.85% NaCl重懸細菌。

4. 在含有0.3 mL的0.85% NaCl的管中加入0.7 mL異丙醇，充分混合（最終濃度為70% 的異丙醇）用以制備死細菌樣品。

5. 將兩種樣品在室溫下孵育1 h，每15 min混合一次。

6. 兩種樣品在5,000-10,000g條件下離心10-15 min。

7. 去除上清，在兩種樣品中加入1 mL的0.85% NaCl重懸細菌，并如步驟6再次離心。

8. 使用分光光度計測定兩種菌懸液在670 nm處的吸光值（OD670）。

9. 將兩種菌懸液（活的和死亡的）密度調整到10⁸個細菌/ mL（OD670≈0.3），然后用0.85% 的NaCl以1：100稀釋，使最終密度為10⁶個細菌/ mL。

10. 如下所示混合兩種菌懸液以獲得所需的活細胞：死細胞比率。

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表1. 活、死菌懸液按一定體積混合以達到所需的活細胞、死細胞比例