氯仿是Trizol試劑提取提取RNA的必需品。由于氯仿為易制毒類化學品，在訂購、使用和儲存等方面有很多的法律法規要求和限制。2019年7月23日，氯仿被納入生態環境部國家衛生健康委員會發布的《有毒有害水污染物名錄(第一批)》；2023年3月1日，氯仿又被納入《重點管控新污染物清單(2023年版)》。氯仿有很強的麻醉作用，主要作用于中樞神經系統，造成肝，腎損害，已被流行病學證實為動物致癌物質，危害很大。氯仿即屬于有毒試劑，又屬于管制試劑，采購受到限制。怎么辦呢？

翌圣生物推出RNA Extraction buffer RNA提取輔助試劑19203ES，該試劑安全、低毒，主要用于在Trizol、TRIeasyTM（10606ES）等RNA抽提過程中完美替代氯仿，快來一起了解下吧！

Trizol法提取總RNA

  基本原理  

Trizol試劑可以直接從組織或細胞中提取總RNA，該試劑的成分為異硫氰酸胍、酚、8-羥基喹啉和β-巰基乙醇。在樣品裂解或勻漿的過程中，trizol試劑能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出來的核酸酶且保持RNA的完整性。加入氯仿離心后，樣品分為水相層和有機相層，RNA存在于水相層中，在酸性條件下總RNA保留在上層水相中。而大部分DNA和蛋白質保留在中間相或下層有機相中。收集上述水樣層后，可通過異丙醇沉淀來回收RNA。此外，樣品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，而在有機層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。

 主要試劑和耗材  

Trizol    氯仿   異丙醇   乙醇   離心管 RNase-Free水  槍頭

 實驗流程圖  

TRIzol 無氯仿解決方案

  01 

加1mL TRIeasyTM（Cat#10606ES）試劑，裂解樣本，室溫孵育5 min；

02 

加0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES） ，振蕩混勻，孵育3 min；

03 

在4°C下12000×g離心樣本15 min；

04 

取約500 μL上清液至新樣本管中；

05 

加等樣本體積的異丙醇，顛倒混勻，在4°C下孵育10 min；

06 

在4°C下12000×g離心10 min，棄上清；

07 

加1mL 75%乙醇，重懸沉淀，短暫渦旋樣本，在4°C下7500×g離心5 min，棄上清液。此步驟重復一次；

08 

干燥5-10 min，加20-50 μL RNase-Free水，在55°C的水浴孵育10min。

19203ES

RNA Extraction buffer RNA提取輔助試劑

 產品亮點  

毒性低：本產品與氯仿的功能非常相似，但不含氯仿，相對毒性低，是氯仿的完美替代品；
分離效果好：本產品替代氯仿提取RNA，具有與氯仿媲美的分離效果；
使用方便、性價比高：每個樣本添加200 μL，使用量與氯仿完全一致。

 產品性能  

采用TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent 10606ES提取10 mg魚肝樣本，實驗組加入0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES），對照組加入0.2 mL氯仿，提取的RNA采用Nanodrop檢測RNA的濃度和純度，取5 μL進行瓊脂糖凝膠電泳。結果如圖所示，翌圣無氯仿提取后的RNA，含量高，純度好，完整性指數高。

訂購信息

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